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1.発現ベクターの検討
本研究では、まず始めに生合成酵素遺伝子の発現に適したベクターの構築のため、各種のプロモーターを有するベクターにTHCA synthase cDNAを組み込み、これをアグロバクテリウム法によりモデル植物のタバコに導入することでTHCA synthaseの発現を検討した。得られた組み換えタバコ培養細胞についてTHCA synthaseの活性を測定した結果、エンハンサー領域を二重にした改良型プロモーターや、翻訳効率を高めるタバコモザイクウイルスΩ配列を組み込んだプロモーターを有するものに比べ、未修飾の35Sプロモーターを有するpBl121ベクターの方が高い活性を与えることが判明した。そこで、発現ベクターとしてpBl121を選択し、THCA synthase及びOLA synthaseのcDNAをセンス、アンチセンスに組み込んだ発現ベクターを構築し、これらをアグロバクテリウムに導入した。
2.大麻への遺伝子導入
次に調製した組み換え用アグロバクテリウムの大麻リーフディスクへの感染を検討した。感染後のリーフディスクについて、抗生物質を含むカルス誘導培地で培養を行ったが、いかなる条件を用いても組み換えカルスの生成を確認するには至らなかった。この原因として葉部に含まれるカンナビノイドの抗菌作用によりアグロバクテリウムが死滅し、感染及び遺伝子導入が不十分となっている可能性が考えられた。このため、カンナビノイドをほとんど含まない未熟植物茎部への感染とカルス誘導を現在検討中である。
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