| 研究概要 |
両生類においてはXnr-1〜6の六つのnodal遺伝子が知られているが、その中でXnr-1のみが左側板中胚葉に発現し、左右性決定に関与するとされている。本研究は、Xnr-1の発現調節機構の解析を通じて、両生類初期胚の左右性決定機構を明らかにすることを目的としている。今年度は、Xnr-1シグナルの活性化機構を中心に解析を行った。NodalをはじめとするTGF-β superfamilyのリガンドは、前駆体蛋白質として分泌され、その-RXXR-モチーフ部位が、Furinなどのエンドペプチダーゼによる限定分解をうけて、活性型に変換する。Furinの仲間(Subtilisin-like proprotein convertase)の阻害剤として働く、RXXRモチーフアナログであるヘキサアルギニン(Hexa-(D)RRRRRR-NH2)やDecanoyl-RVKR-chloromethylketoneの二つのペプチド性阻害剤をツメガエル初期-中期神経胚の側板に注射したところ、左側板に注射した場合にも、右側板に注射した場合にも、5割を超える注射胚に心臓逆位/内臓逆位が生じた。どちらの阻害ペプチド投与の場合にも、注射胚の形は左右性を除いては正常であり、生存率も高かった。従って、Furinの仲間の酵素が左側板ならびに右側板で働くことが、神経胚の左側板特異的なXenopus nodal related-1の発現、ひいては正常な左右性の決定に必要であることとが示唆された。
ツメガエル胚新規nodal遺伝子のクロー.ニングをdegenerate PCR法によって試みたが既知の遺伝子しか増幅できなかった。しかしながら、用いたprimerを硬骨魚類メダカ胚に適用し、nodal相同遺伝子を二つクローニングし、これらをOnr-1,0nr-2と名付けた。
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