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エストロジェン(E2)受容体(ER)トランスジェニックラット(TG)を用いた検討
前年度の研究により、α型ERを含有するニューロンを生きた状態で可視化する目的で、複数存在するラットα型ER遺伝子プロモーターの一つ、プロモーター0/Bの下流にGFP遺伝子を結合させたTGラットが作出された(論文作成中)。GFPの発現は雌性行動において抑制的に働く視索前野(POA)に多数確認され、その半数以上が免疫組織学的にα型ERを含有しており、GFP発現POAニューロンに対するE2の作用を生理学的に検討することが可能となった。現在急性スライスや初代培養細胞を用いた電気生理学的な研究を進めている。一方で雌性行動に促進的に働く視床下部腹内側核(VMH)にはGFPがほとんど観察されなかった。α型ERがVMHに局在していることは明らかであるため、この結果はVMHで機能しているER遺伝子プロモーターがPOAなどとは異なることを示唆しており、E2作用や性行動に対しとかく拮抗的に考えられているPOAとVMHの機構解明にとどまらず、これまで不明であった多種類ER遺伝子プロモーターの存在意義解明に対しブレイクスルーとなると考えている。
VMHニューロンの膜特性に関する電気生理学的解析
前年度に引き続き性行動神経回路上逆行性トレーサーを用いて可視化したVMHニューロンについて電気生理学的解析を試みた。VMHニューロンの脆弱性から急性スライス作製法、急性分散培養法およびトレーサー選択の検討などを行ったが、電気生理学的解析に耐えうる実験系が確立されなかった。更に検討を進めたいと考えている。
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