研究課題
1) miR-33bと動脈硬化についてmiR-33bノックイン(KI)マウス(ヒト化マウス)と動脈硬化モデルApoE欠損マウスを掛けあわせ、動脈硬化の発症・進展について、動脈硬化巣の病理組織、遺伝子発現等から検討する。miR-33b+/+Apoe-/-マウスでは、miR-33b-/-Apoe-/-マウスと比べて、血清HDL-C値の低下を認め、動脈硬化巣の増大と質的悪化を認めた。またこれまでmiR-33ノックアウトマウスでは認められなかったリポ蛋白代謝の変化を認めており、現在このメカニズムについて更なる検討を加えている。(2) miR-33欠損マウスとmiR-33bノックインマウスの交配についてmiR-33a-/-miR-33b-/-マウス(miR-33欠損マウス)、miR-33a+/+miR-33b-/-マウス(野生型)、miR-33a-/-miR-33b+/+マウス(ノックインノックアウトマウス)、miR-33a+/+miR-33b+/+マウス(miR-33bノックインマウス、ヒト化マウス)の四系統のマウスの樹立に成功しており、現在これらのマウスの血清脂質プロファイル等のデータを収集している。これにより、miR-33a、miR-33bの全身での脂質代謝における役割を詳細に検討することが可能となっている。3) 臓器特異的miR-33a欠損マウスを用いた検討についてmiR-33aflox/floxマウスを樹立しており、現在Albmin-Cre ERT2マウスとの交配を開始し、肝臓特異的miR-33aノックアウトマウスの系を樹立している。これから、血清脂質プロファイルを始めとした機能解析を開始していく予定である。
2: おおむね順調に進展している
miR-33a/a*、miR-33b/b*の生体内における脂質代謝調節機構を明らかにするためには、適切なモデル動物の確立が必要となる。昨年度miR-33bノックイン(KI)マウスを樹立することができ、今年度、これらのマウスとすでに樹立済みであったmiR-33aノックアウトマウスとの交配によりmiR-33a、miR-33bの有り無しそれぞれの計4系統のマウスラインを作成した。これにより血清脂質プロファイル等の脂質代謝へのmiR-33a/bの詳細な役割検討が期待でき、現在解析を開始している。また、miR-33bの動脈硬化疾患における役割検討のため、miR-33bKIマウスとApoeノックアウトを交配し行った実験からmiR-33bによる血清HDL-C値低下が動脈硬化悪化をもたらす事が明らかとなった。以上のことから、現在までのところ、研究は概ね順調に進展していると考えている。
(1) miR-33bと動脈硬化について上記のように、miR-33bは血清HDL-C値の低下を介して動脈硬化悪化につながることが明らかとなりつつある。今後は、治療対象としての可能性を考慮して、核酸製剤を用いたmiR-33抑制による動脈硬化への影響を検討する。(2) miR-33bコンディショナルノックインノックアウトマウスの作成miR-33bノックインマウス(ヒト化マウス)は、これまでの実験過程で血清HDL-C値以外のフェノタイプが確認されてきており、miR-33bの臓器・組織特異的の機能解析のため、ノックインマウスにおいてCre-loxPシステムを用いてmiR-33bを臓器・組織特異的にノックアウト行えるマウスの作成を検討し、作業を開始しており、継続予定である。(3) 4系統マウスのフェノタイプ解析miR-33a / miR-33bの有無による4系統マウスのフェノタイプの解析を継続する。
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