研究課題
(1)メダカTol2因子を改変し、トランスポゾンベクターの開発を行った。このトランスポゾンベクターにスプライスアクセプター部位、リポーター遺伝子であるGFP遺伝子を組み込んだ遺伝子トラップベクター及びHSPプロモーターとGFP遺伝子を組み込んだエンハンサートラップベクターを構築した。次に転移酵素をコードするmRNAを試験管内で合成し、これらトラップベクターをもつプラスミドDNAとともに、ゼブラフィッシュ受精卵内へ微量注入により導入した。(2)微量注入を施された胚を成魚にまで育て、かけあわせにより次世代のゼブラフィッシュを得た。それら次世代ゼブラフィッシュ胚を実体蛍光顕微鏡下で観察することにより、GFPを組織特異的、器官特異的に発現するトランスジェニックゼブラフィッシュを合計91系統分離した。(3)これらゼブラフィッシュ系統について、トランスポゾン挿入部位のインバースPCRによる解析を行った。その結果、合計67のトランスポゾン挿入をゼブラフィッシュゲノム上にマップすることができた。(4)これらトランスポゾン挿入をもつヘテロ2倍体フィッシュをかけあわせ、ホモ2倍体胚を作製し、表現型の解析を行った。その結果、劣性致死、及びヒレの形態形成異常を引き起こすトランスポゾン挿入を同定した。ヒレ形成異常変異についてはwntシグナル伝達経路の転写因子をコードする遺伝子へのトランスポゾン挿入が原因であることを明らかにした。
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