神経芽細胞腫の生物学的悪性度診断のための簡易マイクロアレイの開発と臨床応用

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15209058
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 檜山 英三 広島大学, 医学部・歯学部附属病院, 助教授 (00218744)
• 研究分担者: 京 哲 金沢大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (50272969) ; 檜山 桂子 広島大学, 原爆放射線医科学研究所, 助教授 (60253069) ; 高橋 規郎 広島大学, 放射線影響研究所・遺伝学部, 室長(研究職) (40333546) ; 山岡 裕明 広島大学, 医学部・歯学部附属病院, 助手 (90311810)
• キーワード: 神経芽細胞腫 / マイクロアレイ / hTERT / カスパーゼ / メチレーション / 層別化 / 悪性度 / オーダーメイド治療

研究概要

予後が判明している約300の神経芽細胞腫の凍結組織を対象に検討を行った。染色体全領域をカバーする大腸菌人工染色体(BAC)を用いたアレイCGH解析では、既に増幅が確認されているMYCN領域や1p欠損に加え、3・11・14・17番染色体にも変化を認め、これらを網羅的に解析できる簡易アレイCGH作製を計画中である。正常胎児脳組織由来のcDNAアレイ及びマイクロソートテクノロジーにて選別した本腫瘍で特異的に発現が増減する遺伝子約200を用いて100枚の簡易アレイを作製し、解析を行ったところ、予後不良な神経芽腫と予後良好な神経芽腫は100%の確率で層別化できた。また、予後と相関するhTERTおよびCaspase 8,9発現の検討として、これらの遺伝子のプロモーターのCpG領域に特異的にメチル化される部位を識別する簡易アレイを作製した。Caspase8においては4箇所の部位が予後と相関し、同時にメチル化されることがほとんどで、hTERTおよびCaspase9についても検索中であるが、これらの同時に予後と相関するメチル化部位が見出され、これらを網羅的に検出するアレイを作成準備中である。
一方、腫瘍内にheterogeneityの存在する5例、化学療法後摘出腫瘍15例で、腫瘍細胞の部位をマイクロダイセクションし、抽出したDNAあるいはRNAを増幅し、アレイCGH、cDNA簡易アレイの検索を行った。他部位あるいは化学療法前の腫瘍との比較で明らかに悪性度を増していることが明らかになった4例存在はいずれも予後不良で、このように個々の腫瘍細胞の検討も必要であると考えられた。また、多発例11例中3例,再発例8例中4例,再手術で退縮分化が確認された6例中0例でもとの腫瘍と有意な遺伝子量変化、遺伝子発現変化、メチル化の変化を認め、悪性度の変化を検討するのに適した簡易アレイと考えられた。

研究成果

• [文献書誌] Hiyama E. et al.: "Expression profiling of favorable and unfavorable neuroblastomas"Pediatric Surgery International. 20・1. 33-38 (2004)
• [文献書誌] Hiyama E. et al.: "Differential gene expression profiles between neuroblastomas with high telomerase activity and low telomerase activity"Journal of Pediatric Surgery. 38・12. 1730-1734 (2003)
• [文献書誌] Kumazaki T. et al.: "Differential gene expressions during immortalization of normal human fibroblasts and endothelial cells"International Journal of Oncology. in press.
• [文献書誌] Hiyama E. et al.: "Telomerase as tumor marker"Cancer Letters. 194・2. 221-233 (2003)
• [文献書誌] Tanaka T, et al.: "Concise prediction models of anticancer models of 8 drugs using expression data from 12 selected genes"International Journal of Cancer. in press.
• [文献書誌] Uemura, K. et al.: "Comparative analysis of K-ras point mutation, telomerase activity, and p53 overexpression in pancreatic tumours"Oncology Reports. 10・2. 277-283 (2003)
• [文献書誌] 槍山英三 他: "肝芽腫におけるテロメラーゼ・hTERTの発現"小児外科. 35・5. 539-544 (2003)
• [文献書誌] 山田慎一 他: "肝芽腫のcDNA projectによる網羅的遺伝子解析"小児外科. 35・5. 545-549 (2003)
• [文献書誌] 槍山桂子 他: "癌転移-基礎と臨床のアップデートー"日本臨床. 68・増8. 224-228 (2003)
• [文献書誌] Kodaira M, et al.: "Characterization of the microarray-CGH method using model analysis of radiation-induced large deletions at the human HPRT locus"J Hiroshima Med Assoc.. in press.
• [文献書誌] Suzuki G, et al.: "LTA252G allele containing haplotype block is associated with high serum C-reactive protein levels"Atherosclerosis.. in press.
• [文献書誌] Kyo S.et al.: "Significance of immunologicall detection of hTERT : re-evaluation of expression and localization of hTERT"American Journal of Pathology. 163・3. 856-867 (2003)
• [文献書誌] Nakamura M. et al.: "hTERT-promoter-based tumor specific expression of MCP-1 effectively sensitize cervical cancer cells to a low dose of cisplatin"Cancer Gene Therapy. 11・1. 1-7 (2004)
• [文献書誌] Yatabe N et al.: "HIF- 1 -mediated activation of telomerase in cervical cancer cells"Oncogene. in press.
• [文献書誌] Kanzawa T. et al.: "Inhibition of telomerase activity in malignant glioma cells correlates with their sensitivity ti temozolomide"British Journal of Cancer. 89・5. 922-929 (2003)
• [文献書誌] Chen J.et al.: "Modulation of human telomerase reverse transcriptase in hepatocellular carcinoma"World Journal of Gastroenterology. 10・5. 638-642 (2004)
• [文献書誌] Takeda T. et al.: "Tumor-specific gene therapy for undifferentiated thyroid carcinoma utilizing the telomerase reverse transcriptase promoter"Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 88・8. 3531-3538 (2003)
• [文献書誌] 槍山桂子他: "肺癌の最新医学"先端医療技術研究所. 6 (2003)