| 研究概要 |
本研究は、リボソームタンパク質(RP)遺伝子をモデルとして、イントロンの機能と進化および機能性低分子RNAの関わりを明らかにすることを目的とする。平成16年度は、(1)リボソームタンパク質(RP)遺伝子データベースの拡充、(2)イントロン挿入部位の比較、(3)イントロンにコードされている機能性RNAの同定、(4)機能性RNAの機能解析を行った。
1.RP遺伝子データベース'RPG'(http://ribosome.med.miyazaki-u.ac.jp)の充実を図った。本年度は新たに、真核生物2種、古細菌3種、真正細菌3種、ミトコンドリア5種のデータを収集し、現段階で約1,800遺伝子の情報を整備した。
2.RPGデータベースを用いて、ヒト、ショウジョウバエ、線虫、分裂酵母、出芽酵母、ホヤ、シロイヌナズナ、マラリア原虫のイントロン挿入部位を比較した。また、ミトコンドリアRP遺伝子の構造を解析し、細胞質のRP遺伝子と比較した。これらの比較解析から、イントロンがゲノム内に拡散した進化上の時期について重要な知見が得られた。
3.線虫rRNAにおけるメチル化部位の解析を通して、新規snoRNAを同定する手法を確立した。また、RP遺伝子のイントロンに内在するsnoRNA遺伝子を検索し、これらを生物種間で比較した結果、脊椎動物のsnoRNA遺伝子は、宿主遺伝子が共通であっても存在するイントロンの位置に違いがあることを明らかにした。
4.イントロンにコードされたsnoRNAの機能を調べるために、snoRNAをターゲットにしたsiRNA発現ベクターを構築した。また、snoRNAと複合体を形成するタンパク質、FibrillarinとDyskerin、各々の遺伝子に対するモルフォリノ修飾オリゴ(翻訳を阻害する)を合成し、ゼブラフィッシュの受精卵へ微量注入した。現在その表現型を解析している。
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