| 研究概要 |
小胞体ストレスセンサータンパク質の一つであるIREの細胞内ドメインの構造を決定して、ストレス感知直後のシグナル伝達のメカニズムの構造的基盤を構築することを目的とした。IREはI型膜タンパク質であり、哺乳類細胞にはIREαとIREβがあるが、酵母はIre1pのみである。IRE1の細胞内ドメインはセリン・スレオニンタンパク質キナーゼドメインとRNaseドメインをもち、活性化時に、自己リン酸化とともにRNaseが活性化して、RNAの分解によるストレス応答シグナルを伝達する。このようなタンパク質キナーゼドメインを通してRNase活性を制御するという例は他の受容体にはなく、IRE1は全く新規なシグナル伝達の制御機構をもっている点に注目した。
タンパク質発現系や精製系の検討の結果、有望なものとして酵母由来のIre1pのタンパク質キナーゼドメインとRNaseドメインを含むコンストラクトで比較的良好なタンパク質発現を認めた.また,大量発現(2-3L)を試みて、このタンパク質が精製可能であること、比較的に不安定であることを確認した.この精製した資料を用いて,研究室所有の結晶化ロボットを用いて結晶化の大規模なスクリーニングを行った.その結果,再現性に若干問題があるものの,微結晶を得ることに成功した。
この成果は,今後,このセンサーキナーゼの構造生物学的研究を推進する上での重要な一歩となった.今後,結晶化条件の精密化を行い,構造解析に耐えうる結晶として,三次元構造解析を完成させたい.
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