| 研究概要 |
Bld10蛋白質はクラミドモナスの鞭毛基部体(中心小体)形成に必須な蛋白質である.本研究はこれと相互作用する蛋白質を同定し,中心小体構築の分子基盤を明らかにすることを目的として行っている.今年度は以下の進展があった.
【bld10 suppressor変異株の単離】
BLD10と遺伝的な相互作用をする因子を同定するためsuppressorの単離を試みた.null mutantであるbld10ではsuppressorは単離できないため,当初の計画では,まずbld10の点突然変異体を人為的に作製し,その株に対して変異誘発をおこなうというものであった.しかし,nullではないbld10の新規allele (bld10-2)が偶然得られたので,これに対して変異誘発をしたところ,bld10変異形質が回復して鞭毛を形成するようになった株が8株得られた.しかしいずれも鞭毛を1本だけ形成するという不完全な回復であった.遺伝解析によりこれらのうち3株がextragenic,5株がintragenic suppressorであることが判明した.現在,bld10-2の変異,およびこれらのsuppressorの変異の実態を調査中である.
【結合蛋白質の生化学的解析】
生化学的に相互作用蛋白質を同定するため,組換えBld10蛋白質を大腸菌および昆虫細胞で発現させ,可溶性の蛋白質として精製することに成功した.これを用いて,基部体分画の蛋白質に対してブロットオーバーレイ法を行ったところ,結合反応をしめすバンドが10本程度検出された.今後,免疫沈殿法などの解析と組み合わせることによって結合蛋白質候補を絞り込み,遺伝子を同定する予定である.
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