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本研究では、酵母変異株を用いて細胞分裂と細胞増殖(リボソーム生合成)間のクロストークの実態を明らかにし、その分子機構を解明することを目指す。我々は、リボソーム生合成の制御機構を研究する過程で、酵母の細胞増殖における膜輸送系(分泌経路)とリボソーム合成系との間の密接な制御関係を見出した。さらにこの制御に必須な新規蛋白質Rrs1p、それと相互作用する蛋白質Ebp2pを同定し、Rrs1pおよびEbp2pがリボソーム生合成に必須であることを示した。一方、ヒトEbp2pはEBウィルスゲノムDNAの分配に関与することが示唆されている。本研究では、Ebp2pの機能解析を通じて細胞増殖と細胞分裂のクロストークの分子機構を解明する。今年度の成果は以下のとおりである。
(1)RRS1およびEBP2をbaitとして、酵母ゲノムライブラリーおよびcDNAライブラリーから、two-hybrid法において相互作用を示す蛋白質をコードする遺伝子を取得した。
(2)TAP(tandem affinity purification)タグをつけたRrs1pおよびEbp2pを発現する酵母株を作成し、アフィニティ精製によりこれらの蛋白質を含む複合体を調製して、質量分析により構成因子を同定した。その結果、2つの複合体に共通する成分と異なる成分が見つかり、Rrs1pとEbp2pが核小体におけるリボソーム生合成のどのステップに必要であるかを推定することができた。
(3)PCRによりランダムに変異を導入し、rrs1変異株とebp2変異株を取得した。rrs1変異株の解析から、Rrs1pが60Sリボソームサブユニットの核外輸送に必須であることを明らかにした。また、ebp2変異株において、制限温度で娘細胞への核の分配異常が観察された。
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