| 研究概要 |
キュウリモザイクウイルス(CMV)は、タバコモザイクウイルス(TMV)と近縁のプラス鎖RNAウイルスである。本研究では、CMVRNAの複製機構の解析を行い、比較的解明が進んでいるTMVの複製機構と比較することを目的とした。先ず、CMV感染プロトプラストにおける1a,2a複製タンパク質の局在を膜浮遊遠心分画法により解析したところ、1a,2aタンパク質は、液胞膜画分、小胞体など何種類かの膜を含む画分、そして可溶性画分に検出された。1a,2aタンパク質の分画パターンは、TMVの複製タンパク質の分画パターンと酷似していた。脱液胞化したタバコBY2培養細胞由来プロトプラストを脱液胞化、破砕して得た抽出液(BYL)は高い翻訳活性を有し、TMVあるいはCMVRNAを翻訳したあとにRNA合成基質を加えるとRNA複製が起きる。この系でウイルスRNAを試験管内翻訳後、精製した液胞膜を添加してウイルスRNAの複製に影響があるかを調べたところ、液胞膜を加えるとToMV, CMVともに複製効率の上昇がみられた。CMVの複製複合体に含まれる宿主因子を同定するために、アフィニティー精製用のタグを融合した複製タンパク質をコードするCMV誘導体をタバコBY-2細胞にエレクトロポーレーション法により感染させ、感染細胞から複製複合体を含む膜画分を得た。これを界面活性剤で処理したところ、一部の複製タンパク質が可溶化された。さらにここから複製タンパク質をアフィニティー精製すると、結果は予備的ながら宿主由来と考えられるタンパク質が共精製され、共精製されたタンパク質のパターンはTMVの場合と異なっていた。これらの結果から、CMVRNAとTMVRNAの複製複合体は、いずれも液胞膜を含む複数種類の膜上に形成されるが、異なる宿主因子を含むことが示唆された。
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