2003 年度実績報告書

精子形成細胞アポトーシスのミトコンドリアによる分子制御機構

研究課題

研究課題/領域番号	15390058
研究種目	基盤研究(B)
研究機関	長崎大学
研究代表者	小路武彦長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (30170179)
研究分担者	和泉伸一長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助手 (40264246) 江島邦彰長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 講師 (30309984) 菱川善隆長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 講師 (60304276)
キーワード	精子形成細胞 / アポトーシス / ミトコンドリア / Bax / チトクロームC / TUNEL / 電気穿孔法 / 遺伝子導入
研究概要	受精に伴う生命プログラムの初期化を理解する上で、生殖細胞特有な頻回なアポトーシス誘導からの回避機構の解明が必要であると思われる。特に体細胞分裂を繰り返す精粗細胞及び減数分裂を行う精母細胞ではアポトーシス頻度は高く、そのアポトーシスの誘導にはミトコンドリア関連蛋白であるBaxやチトクロームCの強発現並びに細胞内再配置の関与が強く示唆されている。そこで本研究では、正常及びエストロゲン様環境ホルモン物質投与による障害マウス精巣を用いてBax及び関連蛋白の細胞内動態を検討し、アポトーシス誘導制御とミトコンドリアとの機能的及び構造的関係を明らかにすることを目的とする。本年度は、正常成熟雄マウス(ICR)並びにDES(100ngと20mg/Kg体重)及びbisphenol A(BPA)(40ngと4mg/Kg体重)を皮下投与した障害マウスモデルを作製し、精巣試料を採取した。上記切片に於いて、TUNEL法によりアポトーシス細胞の同定を行うと共に抗ミトコンドリア抗体(抗SP-22)を用いた免疫染色を行った。またBax及びチトクロームC(cytC)の免疫染色も行いアポトーシス誘導に関連したミトコンドリア因子動態と生殖細胞死動態の比較を行った。その結果、TUNEL陽性細胞ではBax及びcytCの細胞全体への分布が確認されたが、その超微形態学的な分布には特別な構造との関連傾向などは認められなかった。ミトコンドリア分布の抗SPー22の免疫組織化学による検討では、抗体の浸透性などの問題からバラツキが大きく現段階で詳細な分布変化を見るに至っていない。直接生殖細胞内でミトコンドリアを蛍光標識するため、ミトコンドリアへの移行シグナルをタッグとした蛍光蛋白EYFP発現ベクターを増幅・単離・精製し電気穿孔法で精細管に導入するための必要条件の検討を行ない、試行錯誤の結果精粗細胞での発現を確認することに成功した。

研究成果

(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Koji, T.: "Germ cell apoptosis and its molecular trigger in mouse testes (Review)"Arch.Histol.Cytol.. 66・1. 1-16 (2003)
[文献書誌] Nonaka, M.I.: "Complement C4b-binding protein as a novel murine epididymal secretory protein"Biol.Reprod.. 69・6. 1931-1939 (2003)
[文献書誌] Yamamoto-Fukuda, T.: "Possible involvement of keratinocyte growth factor and its receptor in enhanced epithelial-cell proliferation and acquired recurrence of middle-ear cholesteatoma"Lab.Invest.. 83・1. 123-136 (2003)
[文献書誌] Tsurusaki, T.: "Zone-dependent expression of estrogen receptors α and β in human benign prostatic hyperplasia"J.Clin.Endocrinol.Metab.. 88・3. 1333-1340 (2003)
[文献書誌] Nishino, T.: "Antisense oligonucleotides against collagen-binding stress protein HSP47 suppress peritoneal fibrosis in rats"Kidney Int.. 64・3. 887-896 (2003)
[文献書誌] Okada, K.: "Expression of tumor-associated membrane antigen, RCAS1, in human colorectal carcinomas and possible role in apoptosis of tumor-infiltrating lymphocytes"Modern Pathol.. 16・7. 679-685 (2003)
[文献書誌] 小路武彦: "遺伝子組織化学総論[組織細胞化学2003](日本組織細胞化学会編)"学際企画. 12 (2003)

2003 年度 実績報告書

精子形成細胞アポトーシスのミトコンドリアによる分子制御機構

研究代表者

小路 武彦 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (30170179)

研究成果

[文献書誌] Koji, T.: "Germ cell apoptosis and its molecular trigger in mouse testes (Review)"Arch.Histol.Cytol.. 66・1. 1-16 (2003)

[文献書誌] Nonaka, M.I.: "Complement C4b-binding protein as a novel murine epididymal secretory protein"Biol.Reprod.. 69・6. 1931-1939 (2003)

[文献書誌] Yamamoto-Fukuda, T.: "Possible involvement of keratinocyte growth factor and its receptor in enhanced epithelial-cell proliferation and acquired recurrence of middle-ear cholesteatoma"Lab.Invest.. 83・1. 123-136 (2003)

[文献書誌] Tsurusaki, T.: "Zone-dependent expression of estrogen receptors α and β in human benign prostatic hyperplasia"J.Clin.Endocrinol.Metab.. 88・3. 1333-1340 (2003)

[文献書誌] Nishino, T.: "Antisense oligonucleotides against collagen-binding stress protein HSP47 suppress peritoneal fibrosis in rats"Kidney Int.. 64・3. 887-896 (2003)

[文献書誌] Okada, K.: "Expression of tumor-associated membrane antigen, RCAS1, in human colorectal carcinomas and possible role in apoptosis of tumor-infiltrating lymphocytes"Modern Pathol.. 16・7. 679-685 (2003)

[文献書誌] 小路武彦: "遺伝子組織化学総論[組織細胞化学2003](日本組織細胞化学会編)"学際企画. 12 (2003)

2003 年度実績報告書

小路武彦長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (30170179)