心・血管における活性酸素/NOによるレドックス制御の解明

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15390066
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 東海大学
• 研究代表者: 中澤 博江 東海大学, 医学部, 教授 (20110885)
• 研究分担者: 竹腰 進 東海大学, 医学部, 講師 (70216878) ; 福山 直人 東海大学, 医学部, 講師 (50349338) ; 石田 英之 東海大学, 医学部, 助教授 (20222424) ; 後藤 信哉 東海大学, 医学部, 助教授 (50225653)
• キーワード: レドックス / 心・血管系 / 活性酸素 / nitric oxide

研究概要

各種細胞からのlow output活性酸素生成系の同定と活性化機構の解明
〔血管内皮細胞、血管平滑筋細胞からの活性酸素/NOの検出〕
ヒト冠動脈から得られた培養血管内皮細胞と培養血管平滑筋細胞を直径5cmのwellにconfluentした状態で実験を行った。細胞にヒト血漿より得られたLDL、HDL、TG分画を(Bufferと1:4濃度)添加し、72時間後の活性酸素生成を測定した。また上清のNO_2^-+NO_3^-、VEGF、ICAM-1、P-selectin、フォンビルブラント因子、PAI-1を測定した。さらに細胞表面のICAM-1、P-selectinの免疫染色を行った。
結果:最も大きく変化したものは、PAI-1で、あった。LDL添加で3450±88、HDL;4562±75、TG;3200±66unitsであった。活性酸素生成についてはHDL添加群で低下していた。PAI-1を上昇させる細胞内情報伝達経過として、Erk、MAPK、NFκBを検討しているが、現在明瞭な変化を認めていない。HDLとLDLの脱脂処理を行ったものでも同様にHDLの方が高く、この現象は脱脂ではなく、Apo蛋白の性質に由来すると考えられた。また、血管平滑筋細胞ではPAI-1の分泌は342±28に留まっていた。
考察:HDLがPAI-1を上昇させたことは、LDLがPAI-1を高めたとする過去の研究のほとんどと相反する成績である。これは非常に重要な結果であるため、そのメカニズムを明らかにする。手段としてHDL、LDL、TGのコレステロール含有量、アポ蛋白(ApoB、ApoE、ApoA)を測定し、それらでnormalizeした濃度での反応を検討することを予定している。その結果、PAI-1のmRNAをNorthan blottingで測定する予定である。

研究成果

• [文献書誌] Hoshiai K: "Inhibition of nitrotyrosine formation reduces endotoxin-induced liver injury irrespective of TNF-α"J Clin Biochem Nutr. 33. 61-67 (2003)
• [文献書誌] Takizawa S: "Repaerfusion enhances nitrotyrosine formation in rat focal cerebral ischemia"J Stroke Cerebrovasc Disease. 12. 196-200 (2003)
• [文献書誌] Takizawa S: "Quercetin, a natural flavonoid, attenuates vacuolar formation in the optic tract in rat chronic cerebral hypoperfusion model"Brain Res. 980. 156-160 (2003)
• [文献書誌] Ichimori K: "Myeloperoxidase has directly-opposed effects on nitration reaction-study on myeloperoxidase-deficient patient and myeloperoxidase-knockout mice"Free Radic Res. 37. 481-489 (2003)
• [文献書誌] Masuda T: "High extracellular inorganic phosphate causes reductioin of intracellular free magnesium in perfused rat heart"Trakia J Science. 1. 15-21 (2003)
• [文献書誌] Hojo M: "Induction of vascular endothelial growth factor by fibrin as a dermal substrate for cultured skin substitute"Plast Reconstr Surg. 111. 1638-1645 (2003)
• [文献書誌] Kasahara H: "Iodegradable gelatin hydrogel potentiates the sngiogenic effect of fibroblast growth factor 4 plasmid in rabbit hindlimb ischemia"J Am Coll Cardiol. 41. 1056-1062 (2003)
• [文献書誌] Meng H: "Pyridoxalphosphate-6-azophenyl-2',4'-disulfonic acid can antagonize the purinoceptor-mediated inhibition of M-current in bullfrog sympathetic neurons"Neurosci Lett. 337. 93-96 (2003)
• [文献書誌] Shoyama Y: "Anti-inflammatory effect of Peltebagrus nudiceps extract on rat model of CFA-induced pulmonary tuberculous granuloma"Pathophysiology. 9. 89-98 (2003)