| 研究課題/領域番号 |
15390126
|
|---|
| 研究機関 | 浜松医科大学 |
|---|
研究代表者 |
筒井 祥博 浜松医科大学, 医学部, 教授 (50073135)
|
|---|
| 研究分担者 |
小杉 伊三夫 浜松医科大学, 医学部, 助教授 (10252173)
土田 孝 浜松医科大学, 医学部, 助手 (30317755)
|
|---|
| キーワード | 脳障害 / 潜伏感染 / 神経幹細胞 / 胎生幹細胞 / 大脳スライス培養 / トランスジェニックマウス |
|---|
| 研究概要 |
発育期嚢はサイトメガロウイルス(CMV)に感受性が高く、溶解感染して脳形成障害を起こすだけでなく、潜伏感染し、免疫不全などにより再活性化し、また神経細胞に持続感染することによって、脳機能障害が生ずると考えられる。私達は既にマウスCMV(MCMV)を発育期脳に感染させ、180日間飼育した潜伏感染状態のマウス脳を大脳スライス培養すると、脳室壁の未分化神経系細胞から再活性化すると考えられた。このことをさらに明らかにするために、未分化神経細胞のマーカーであるnestin-promoter-EGFPの導入されたtransgenic (Tg) miceを潜伏感染状態とし、nestin-promoter活性を示す未分化神経細胞(neurospheres)を分離して再活性化が生ずるか検討してきた。
1)培養系に移すと、比較的早い時期に再活性化して、nestin発現細胞から再活性化することを同定することは困難であった。そこで培養系に移した直後に、ウイルス増殖抑制剤であるガンシクロビア(GCV)などを加え、活性化を遅らすことによって再活性化する細胞の同定する試みを行っている。
2)また、私達は免疫抑制剤であるcyclosporine AがMCMVの増殖を抑制することを明らかにし、in vitroおよびin vivoにおいて、その作用機序を解析している。
3)MCMV前初期(IE)promoter-lacZが導入されたTgマウスからES細胞を樹立し、未分化なES細胞ではMCMVに感受性がなく、分化させると感受性が出現することを明らかにした。グリア系に分化した細胞が感受性を示したが、同時にIE-promoterが活性化することを示した。
さらに、4)神経特異的に発現するE1-promoterEGFPを発現する変異ウイルスの作成に成功したので、IE-promoter-RGFPを発現する変異ウイルスも作成し、in vitroおよびin vivoでの感染における発現の特異性、潜伏感染における発現の相違を解析する。
|
