再生医学応用を目指したブタ免疫システム解析と免疫不全ブタ作製

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15390133
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 国立成育医療センター研究所
• 研究代表者: 藤本 純一郎 国立成育医療センター研究所, 副所長 (60175578)
• 研究分担者: 安江 博 独立行政法人農業生物資源研究所, ゲノム研究グループ, 上席研究官 (80113497) ; 山田 健人 慶應義塾大学, 医学部, 専任講師 (60230463) ; 清河 信敬 国立成育医療センター研究所, 発生・分化研究部, 室長 (60195401)
• キーワード: 免疫不全ブタ / 再生医療 / cDNAライブラリー / ブタTリンパ球 / 主要組織適合抗原 / T細胞抗原受容体

研究概要

ブタ免疫関連遺伝子単離と構造解析ならびに機能解析を通じてブタ免疫システムの特徴を明確にし、その制御法開発を通じて、医用応用を目指した免疫不全ブタを作成することを目的として研究を行った。免疫不全ブタの作成は米国研究者との共同研究として進行中で、ブタ胎仔由来線維芽細胞で片方アレルでのrag1遺伝子破壊細胞を確立した。ブタ末血Tリンパ球から作成したcDNAライブラリーからCommonγ鎖遺伝子を単離するとともにゲノム構造およびプロモーター活性検討を終了した。これらの成果は共著として発表した。また、Commonγ鎖遺伝子破壊用ベクター作成を終了した。ブタ血球に対するモノクローナル抗体作成については、T細胞抗原受容体δ鎖(TCRδ)に対する抗体7G3を確立し、上記cDNAライブラリーから作成したTCRδ組み換え体との反応性を検討した。その結果、TCRδのコモンフレームワークに対する抗体であることを確認した。また、血球全般に反応する抗体4G8を同様にcDNAライブラリーから作成した組み換え体と反応させた結果、ブタクラスI主要組織適合抗原(Class I MHC)α鎖と反応することを確認した。4G8抗体については共著論文が受理された。その他、ブタCD8α鎖に対する抗体、GPIアンカー型蛋白に対する抗体等が得られており現在詳細検討を行っている。また、ブタTリンパ球cDNAライブラリーから各種の免疫応答関連サイトカイン遺伝子候補が見つかっており現在その詳細についても検討を行っている。なお、免疫不全ブタ作成をより効率的に行うために、SiRNAによる遺伝子発現抑制を目指したベクター開発も開始している。

研究成果

• [文献書誌] Tang W, Kiyokawa N, Eguchi T, Matsui J, Takenouchi H, Nonma D, Yasue H, Enosawa S, Mimori K, Itagaki M, Taguchi T, Katagiri YU, Okita H, Amemiya H, Fujimoto J: "Development of novel monoclonal antibody 4G8 against swine leukocyte antigen class I alpha chain."Hybridoma and Hybridomics. 印刷中. (2004)
• [文献書誌] Honma D, Uenishi H, Hiraiwa H, Watanabe S, Tang W, Kiyokawa N, Fujimoto J, Yasue H, Sakimura K: "Cloning and characterization of porcine common gamma chain gene."J Interferon Cytokine Res.. 23(2). 101-111 (2003)
• [文献書誌] Taguchi T, Kiyokawa N, Mimori K, Suzuki T, Sekino T, Nakajima H, Saito M, Katagiri-U Y, Matsuo N, Matsuo Y, Karasuyama H, Fujimoto J: "Pre-BCR-mediated signal inhibits CD24-induced apoptosis in human pre-B cells."J Immunol. 170(1). 252-260 (2003)
• [文献書誌] Uenishi H, Hiraiwa H, Yamamoto R, Yasue H, Takagaki Y, Shiina T, Kikkawa E, Inoko H, Awata T.: "Genomic structure around joining segments and constant regions of swine T-cell receptor alpha/delta (TRA/TRD) locus."Immunology. 109(4). 515-526 (2003)
• [文献書誌] Fujisaki S, Sugiyama A, Eguchi T, Watanabe Y, Hiraiwa H, Honma D, Saito T, Yasue H: "Analysis of a full-length cDNA library constructed from swine olfactory bulb for elucidation of expressed genes and their transcription initiation sites."J Vet Med Sci. 印刷中. (2004)