再生医学応用を目指したブタ免疫システム解析と免疫不全ブタ作製

2004 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15390133
• 研究機関: 国立成育医療センター(研究所)
• 研究代表者: 藤本 純一郎 国立成育医療センター研究所, 副所長 (60175578)
• 研究分担者: 清河 信敬 国立成育医療センター研究所, 発生・分化研究部, 部長 (60195401) ; 山田 健人 慶應義塾大学, 医学部, 専任講師 (60230463) ; 安江 博 独立行政法人農業生物資源研究所, ゲノム研究グループ, 上席研究官 (80113497)
• キーワード: 免疫不全ブタ / 再生医療 / cDNAライブラリー / ブタTリンパ球 / 腫瘍組織適合抗原 / T細胞抗原受容体

研究概要

ブタ免疫関連遺伝子単離と構造解析ならびに機能解析を通じてブタ免疫システムの特徴を明確にし、その制御法開発を通じて、医用応用を目指した免疫不全ブタを作成することを目的として研究を行った。免疫不全ブタの作成は米国研究者との共同研究として進行中で、ブタ胎仔由来線維芽細胞で片方アレルでのrag1遺伝子破壊繊維芽細胞を確立し、これを用いたクローンブタ作出を試みている。ブタ末梢血Tリンパ球から作成したcDNAライブラリーからPre-TCRα鎖遺伝子を単離し、その全cDNA配列を決定した。そのcDNAの翻訳領域は、684塩基からなり、Pre-TCRα鎖が228アミノ酸から構成されていることが示された。翻訳領域の塩基配列レベルでのヒトとの相同性は70%であった。アミノ酸レベルの相同性は68%であった。同様に、ヒトとマウスとの相同性は、塩基レベルで77%、アミノ酸レベルで76%であることから、ヒト-マウスの遺伝的近縁度はヒト-ブタのそれより高いと判断される。ブタ血球に対するモノクローナル抗体作成については、T細胞抗原受容体δ鎖(TCRδ)のコモンフレームワークに対する抗体7G3を樹立した。また、ブタクラスI主要組織適合抗原(Class I MHC)α鎖を認識する抗体4G8を樹立した。いずれの抗体も、フローサイトメトリーによるリンパ球サブセット解析、ならびにブタ免疫関連臓器の免疫組織科学的解析に有用性が高いことを確認した。さらに、GPIアンカー型蛋白に対する抗体等が得られており現在詳細検討を行っている。免疫不全ブタ作成をより効率的に行うために、SiRNAによる遺伝子発現抑制を目指したベクター開発を開始した。

研究成果

• [雑誌論文] Characterization of new monoclonal antibodies against porcine lymphocytes : molecular characterization of clone 7G3,an antibody reactive with the constant region of the T-cell receptor δ-chains. (2005)
  • 著者名/発表者名: Tang W-R, Shioya N, Eguchi T, Ebata T, Matsui J, Takenouchi H, Honma D, Yasue H, Takagaki Y, Enosawa S, Itagaki M, Taguchi T, Kiyokawa N, Amemiya H, Fujimoto J.
  • 雑誌名: Veterinary Immunol Immunopathol (in press)
• [雑誌論文] Development of novel monoclonal antibody 4G8 against swine leukocyte antigen class I alpha chain. (2004)
  • 著者名/発表者名: Tang W, Kiyokawa N, Eguchi T, Matsui J, Takenouchi H, Nonma D, Yasue H, Enosawa S, Mimori K, Itagaki M, Taguchi T, Katagiri YU, Okita H, Amemiya H, Fujimoto J.
  • 雑誌名: Hybridoma and Hybridomics 23 ページ: 187-191
• [雑誌論文] Nucleotide sequencing analysis of the swine 433-kb genomic segment located between the non-classical and classical SLA class I gene clusters. (2004)
  • 著者名/発表者名: Shigenari A, Ando A, Renard C, Chardon P, Shiina T, Kulski JK, Yasue H, Inoko H.
  • 雑誌名: Immunogenetics. 55 ページ: 695-705
• [雑誌論文] Trophinin is expressed in the porcine endometrium during the estrous cycle. (2004)
  • 著者名/発表者名: Nakano S, Kishi H, Ogawa H, Yasue H, Okano A, Okuda K.
  • 雑誌名: J Reprod Dev 49 ページ: 127-134
• [雑誌論文] Analysis of a full-length cDNA library constructed from swine olfactory bulb for elucidation of expressed genes and their transcription initiation sites. (2004)
  • 著者名/発表者名: Fujisaki S, Sugiyama A, Eguchi T, Watanabe Y, Hiraiwa H, Honma D, Saito T, Yasue H.
  • 雑誌名: J Vet Med Sci 66 ページ: 15-23