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我々は既に酵母細胞でHIV-1の粒子形成過程が再現できることを明らかにしている。本研究では、HIV粒子主構造蛋白であるGag蛋白の細胞内輸送経路と関与する宿主因子を解明する目的で、エンドソーム経路の輸送蛋白質欠損酵母株を用いたGag蛋白細胞内輸送経路の網羅的解析を行うとともに、酵母CytoTrap two-hybridsystemを用いてGag蛋白細胞内輸送の新規責任宿主因子の単離・同定を試みた。
1)Gag蛋白細胞内輸送における経路のエンドソーム輸送経路の解析
エンドソーム経路輸送蛋白欠損酵母株を用いてGag蛋白細胞内輸送を解析し、初期/後期エンドソームt-SNAREをその責任宿主因子として特定した(昨年度)。本年は、これら宿主因子が真のGag輸送の責任宿主因子か、ヒト細胞で検証した。これらのヒトホモログをRNA干渉法でdepleteしたところHIV粒子産生が低下した。逆に、それらをover-expressionさせると粒子産生量が増加した。以上の結果より、これら宿主因子はHIV-1 Gag蛋白細胞内輸送の責任宿主因子と結論された。また、これら宿主因子のN末端あるいはC末端半分の共発現はdominant-negativeに粒子産生を阻害することを明らかにした。
2)Gag蛋白細胞内輸送の新規責任宿主因子の単離・同定
Gag蛋白結合する宿主蛋白を探索する目的で、酵母のCytoTrap two-hybridsystem(従来のtwo-hybridsystemとは異なり、細胞質内で相互作用を行わせる系)を用いてヒトcDNAの発現ライブラリを探索し、2-3個の陽性クローンを見出した。
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