| 研究概要 |
我々は既に酵母細胞でHIV-1の粒子形成過程が再現できることを明らかにしている。本研究では、HIV粒子主構造蛋白であるGag蛋白の細胞内輸送経路と関与する宿主因子を解明する目的で、1)近年関与が示唆されているエンドソーム経路の輸送蛋白質欠損酵母株を用いたGag蛋白細胞内輸送経路の網羅的解析、2)HIV-2 Gagに固有の粒子形成領域の同定、3)酵母CytoTrap two-hybridsystemを用いたGag蛋白細胞内輸送の新規責任宿主因子の単離・同定を試みた。
1)Gag蛋白細胞内輸送における経路のエンドソーム輸送経路の解析
エンドソーム経路輸送蛋白質欠損酵母株を用いてHIV-1Gag蛋白細胞内輸送を解析し、初期/後期エンドソームt-SNARE(Tlg1,Tlg2,Pep12)をその責任宿主因子として特定した。ヒト細胞において、これら宿主因子のヒトホモログをRNA干渉法でdepleteしたところHIV粒子産生の低下が、逆にover-expressionさせると粒子産生量が増加した。以上の結果より、これら宿主因子はHIV-1Gag蛋白細胞内輸送の責任宿主因子と結論された。
2)HIV-2/SIVmac固有の粒子形成領域の同定
酵母細胞ではHIV-2/SIVmacのGag粒子形成過程が再現できないことを見出した。この原因を調べたところ、i)その責任領域はGag蛋白アミノ末端領域であり、ii)Gag蛋白の細胞内輸送及び形質膜targetingに異常は認められないものの、iii)低張液における膜親和性は著しく低下し、iv)その結果として粒子出芽の段階で阻害されることを明らかにした。
3)Gag蛋白細胞内輸送の新規責任宿主因子の単離・同定
Gag蛋白結合する新規宿主因子を同定する目的で、酵母のCytoTrap two-hybrid system(従来のtwo-hybridsystemとは異なり、細胞質内で相互作用を行わせる系)を用いてヒトcDNA発現ライブラリを探索し、2-3個の陽性クローンを単離した。
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