グルココルチコイドの標的遺伝子の解析

2005 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 15390331
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 小児科学
• 研究機関: 国立成育医療センター(研究所)
• 研究代表者: 宮下 俊之 国立成育医療センター(研究所), 成育遺伝研究部, 室長 (60174182)
• 研究期間 (年度): 2003 – 2005
• キーワード: グルココルチコイド / 白血病 / アポトーシス / 転写因子 / マイクロアレイ

研究概要

グルココルチコイド(GC)は生体内で産生されるステロイドホルモンであると同時に白血病、アレルギー疾患等、広範囲にわたる疾患の治療にも用いられる薬剤である。GCはある種の白血病細胞に細胞増殖の停止とアポトーシスを誘導するが、その分子機序は不明な点が多い。グルココルチコイドレセプター(GR)は転写因子のひとつであり、リガンドであるGCが結合することによって活性化し、細胞質内から核に移行して標的遣伝子の転写を活性化させる。我々は白血病細胞がGCによってアポトーシスを起こす際、発現が変化する遺伝子をオリゴヌクレオチドマイクロアレイを用いて解析し、GCにより発現が上昇する遺伝子93個、低下する遺伝子28個を見出した。その中からGCによって発現が誘導される3遺伝子、Down syndrome critical region 1(DSCR1)、FK506binding proteinのひとっをコードするFKBP5、セリンプロテアーゼをコードするGranzyme A (GzmA)のに注目して解析を進めた。レポーター遺伝子アッセイ法、ゲル移動度シフト法でFKBP51のイントロン1とGzmAのイントロン2に機能的なGR結合配列が存在することがわかった。更にDSCR1とFKBP51対するsmall interference RNAを設計し、レンチウイルスベクター系を用いてGCによってアポトーシスが誘導される白血病細胞に導入した。RNA干渉により、標的遺伝子の転写が抑制されたが、単独の遺伝子をノックダウンするだけではGCによるアポトーシスの程度には明らかな影響が認められなかった。

研究成果

• [雑誌論文] Detecting tissue-specific alternative splicing and disease-associated aberrant splicing of the PTCH gene with exon junction microarrays. (2005)
  • 著者名/発表者名: Nagao K, et al.
  • 雑誌名: Human Molecular Genetics 14(22) ページ: 3379-3388
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Identification and characterization of multiple isoforms of a murine and human tumor suppressor, patched, having distinct first exons. (2005)
  • 著者名/発表者名: Nagao K, et al.
  • 雑誌名: Genomics 85(4) ページ: 462-471
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Frequent occurrence of protein isoforms with or without a single amino acid residue by subtle alternative splicing : the case of Gln in DRPLA affects subcellular localization of the products. (2005)
  • 著者名/発表者名: Tadokoro K, et al.
  • 雑誌名: Journal of Human Genetics 50(8) ページ: 382-394
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Identification of a novel polymorphism involving a CGG repeat in the PTCH gene and a genome-wide screening of CGG-containing genes. (2004)
  • 著者名/発表者名: Nagao K, et al.
  • 雑誌名: Journal of Human Genetics 49(2) ページ: 97-101
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Interaction of apoptosis signal-regulating kinase I with isoforms of 14-3-3 proteins. (2004)
  • 著者名/発表者名: Subramanian RR, et al.
  • 雑誌名: Experimental Cell Research 294(2) ページ: 581-591
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Identification of novel direct transcriptional targets of glucocorticoid receptor. (2004)
  • 著者名/発表者名: U M, et al.
  • 雑誌名: Leukemia 18(11) ページ: 1850-1856
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Interaction of apoptosis signal-regulating kinase 1 with isoforms of 14-3-3 proteins. (2004)
  • 著者名/発表者名: Subramanian RR, et al.
  • 雑誌名: Experimental Cell Research 294(2) ページ: 581-591
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Confocal Microscopy for Intracellular Co-Localization of Proteins. (2004)
  • 著者名/発表者名: Miyashita T.
  • 雑誌名: Methods in Molecular Biology : Protein-Protein Interactions : Methods and Applications(Fu H.(ed.))(Humana Press, Totowa, USA) Vol.261 ページ: 399-410
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Gorlin syndrome with ulcerative colitis in a Japanese girl. (2003)
  • 著者名/発表者名: Fujii K, et al.
  • 雑誌名: American Journal of Medical Genetics 121A(1) ページ: 65-68
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Mutations in the human homologue of Drosophila patched in Japanese nevoid basal cell carcinoma syndrome patients. (2003)
  • 著者名/発表者名: Fujii K, et al.
  • 雑誌名: Human Mutation 21(4) ページ: 451-452
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Caspase-8 and caspase-10 activate NF-κB through RIP, NIK and IKKa kinases. (2003)
  • 著者名/発表者名: Shikama Y, et al.
  • 雑誌名: European Journal of Immunology 33(7) ページ: 1998-2006
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Genomic structure and alternative splicing of the insulin receptor tyrosine kinase substrate of 53-kDa protein. (2003)
  • 著者名/発表者名: Miyahara A, et al.
  • 雑誌名: Journal of Human Genetics 48(8) ページ: 410-414
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Dentatorubral-pallidoluysian atrophy protein is phosphorylated by c-Jun NH_2-terminal kinase. (2003)
  • 著者名/発表者名: Okamura-Oho Y, et al.
  • 雑誌名: Human Molecular Genetics 12(13) ページ: 1535-1542
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Effects of TNFα on the growth and sensitivity to cytosine arabinoside of blast progenitors in acute myelogenous leukemia with special reference to the role of NF-κB. (2003)
  • 著者名/発表者名: Wu Z, et al.
  • 雑誌名: Leukemia Research 27(11) ページ: 1009-1018
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] HSpinl, a transmembrane protein interacting with Bcl-2/Bcl-x_L, induces a caspase-independent autophagic cell death. (2003)
  • 著者名/発表者名: Yanagisawa H, et al.
  • 雑誌名: Cell Death and Differentiation 10(7) ページ: 798-807
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Caspase-8 and caspase-10 activate NF-κB through RIP, NIK and IKKα kinases. (2003)
  • 著者名/発表者名: Shikama Y, et al.
  • 雑誌名: European Journal of Immunology 33(7) ページ: 1998-2006
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] HSpin1, a transmembrane protein interacting with Bcl-2/Bcl-x_L, induces a caspase-independent autophagic cell death. (2003)
  • 著者名/発表者名: Yanagisawa H, et al.
  • 雑誌名: Cell Death and Differentiation 10(7) ページ: 798-807
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [図書] Confocal Microscopy for Intracellular Co-Localization of Proteins. In Fu H. (ed.), "Methods in Molecular Biology Vol. 26 : Protein-Protein Interactions : Methods and Applications" (2004)
  • 著者名/発表者名: Miyashita T
  • 総ページ数: 12
  • 出版者: Humana Press
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より