| 研究概要 |
大腸癌リンパ節転移における腫瘍細胞のCD44発現とそのリガンドであるヒアルロン酸との相互作用について、ヒト大腸癌細胞株LS174T、LS174T-NEO、LS174T-AS1,-AS2、Colo320、CloneAを用いて解析した。LS174T-AS1,-AS2はLS174Tにantisense CD44を組み込んだ発現ベクターを導入して樹立された細胞株、LS174T-NEOはコントロールとしてantisense CD44を含まない発現ベクターを遺伝子導入した細胞株である。マウス盲腸組織のリンパ管像を観察するために抗マウスVEGFR-3抗体を用いて、免疫染色を行った。CD44発現とリンパ節との接着性との関連性を検討する目的で正常リンパ節の凍結切片を用いてStamper-Woodruff assayを行った。ヌードマウス同所移植で、CD44強発現株であるLS174T、LS174T-NEOが90%にリンパ節転移を形成した(n=10)。CD44弱発現株であるLS174T-AS1、CloneAはそれぞれ40%、30%(いずれもn=10)のリンパ節転移形成率であった。CD44発現がほぼ完全に抑制された細胞株あるいは無発現株であるLS174T-AS2、Colo320は、リンパ節転移を形成しなかった。
さらに"リンパ管浸潤関連遺伝子群の同定"に向けて、リンパ行性転移微細動態の生体内リアルタイム解析を行った。GFP導入ヒト大腸癌細胞株VEGFR-3-GFPをtransgenic nude mouseに移植(dorsal skin-fold chamber法および同所移植法)し、生体蛍光顕微鏡システムを用いて、腫瘍リンパ管新生・リンパ管浸潤・リンパ節転移の初期像のリアルタイム観察を行ってきた。
リンパ管浸潤関連遺伝子群を同定するために、上記のin vivoによる実験を、複数の大腸癌細胞株(LS174T, MIP101, CloneAなど)にて進めてきたが、リンパ節非転移株、高転移株についてmRNAを抽出、マイクロアレイによる発現解析を進め、両者で異なる発現様式を示す遺伝子群を明らかにした。これらの遺伝子のいくつかについて、RT-PCRあるいはin situ hybridization法による結果の再現性が得られた。DNAフラグメント解析システムGenePhor(Amersham)を併用することで、大腸癌細胞株のgenotypeの決定と、解析侯補遺伝子群の多型性をスクリーニングできた。
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