脳腫瘍抗原を用いた免疫モニタリング法および抗原特異的な免疫療法の開発

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15390444
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 慶應義塾大学
• 研究代表者: 戸田 正博 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (20217508)
• 研究分担者: 河瀬 斌 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (40095592) ; 河上 裕 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (50161287)
• キーワード: HSV / 脳腫瘍抗原 / SEREX / 癌ワクチン / エピトープ解析 / 免疫モニタリング

研究概要

我々はグリオーマ細胞株よりcDNAライブラリーを作製し、グリオーマ患者血清を用いてSEREX(serological identification of antigens by recombinant expression cloning)解析を行い、新規遺伝子を含む10種類以上のIgGに認識される脳腫瘍抗原を同定している。
本研究では、脳腫瘍抗原に対する免疫応答解析法の開発を目的として、同定された抗原の抗体およびT細胞に認識されるエピトープの解析を目的とする。
脳腫瘍抗原のエピトープ解析および免疫モニタリング法の構築
(1)同定された脳腫瘍抗原のT細胞に認識されるエピトープの解析
同定された抗原のアミノ酸配列から日本人に多いHLA-A24,HLA-A2に結合するペプチドを選出し、さらにプロテアソームによる切断予測部位を解析することにより、エピトープ候補ペプチドを10種決定した。グリオーマ反応性T細胞の誘導能を解析するため、ペプチド存在下での末梢血リンパ球の培養を開始した。
(2)抗原遺伝子の発現ベクターの作製と組み換え蛋白の精製
大腸菌ベクター(融合タンパク発現)に抗原遺伝子を組み込み、発現したタンパクのカラムによる精製を行った。
(3)同定抗原に対する免疫モニタリング法の確立
精製された融合タンパクを用いて、ELISAシステムを構築し、同定抗原に対する血清中抗体の解析法を確立した。
今後はエピトープペプチドを用いて、HLAテトラマーおよびEIispotシステムを構築し同定抗原に対する末梢血中T細胞の解析法を確立する予定である。

研究成果

• [文献書誌] Toda M: "Immuno-viral therapy as a new approach for the treatment of brain tumors."Drug News & Perspect. 16(4). 223-229 (2003)
• [文献書誌] Ueda R, Iizuka Y, Yoshida K, Kawase T, Kawakami Y, Toda M: "Identification of a human glioma antigen, SOX6, recognized by patients' sera"Oncogene. 23. 1420-1427 (2004)
• [文献書誌] Iizuka Y, Suzuki A, Kawakami Y, Toda M: "Augmentation of antitumor immune responses by multiple intratumoral inoculations of replication-conditional HSV and interleukin-12"J Immunotherapy. 27(2). 92-98 (2004)
• [文献書誌] Toda M, Kawakami Y: "Cancer vaccine and immunotherapy for brain tumors."Curr Pharm Des. in press.
• [文献書誌] Mikami Y, Okano H, Sakaguchi M, Nakamura M, Shimazaki T, Okano JH, Kawakami Y, Toyama Y, Toda M: "Implantation of dendritic cells in injured adult spinal cord results in activation of endogenous neural stem/progenitor cells leading to de novo neurogenesis, and functional recovery"J Neurosci Res. in press.
• [文献書誌] 戸田 正博: "腫瘍ワクチン療法"CLINICAL NEUROSCIENCE. 21(5). 543-543 (2003)
• [文献書誌] 戸田 正博: "がん治療のあゆみ"がん集学的治療研究財団. 69 (2003)
• [文献書誌] 三上裕嗣, 戸田正博, 中村雅也, 岡野栄之, 戸山芳昭: "先端医療シリーズ22 整形外科の最新医療"先端医療技術研究所. 431 (2003)