中国における小反芻動物の住血原虫感染症の実態解明と制圧法の開拓

2005 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 15405036
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 海外学術
• 研究分野: 基礎獣医学・基礎畜産学
• 研究機関: 北海道大学 (2005); 帯広畜産大学 (2003-2004)
• 研究代表者: 杉本 千尋 北海道大学, 人獣共通感染症リサーチセンター, 教授 (90231373)
• 研究分担者: 藤崎 幸蔵 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 教授 (00292095) ; 玄 学南 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 教授 (10292096) ; 井上 昇 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 助教授 (10271751) ; 横山 直明 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 助教授 (80301802)
• 研究期間 (年度): 2003 – 2005
• キーワード: タイレリア / バベシア / トリパノソーマ / 中国 / 原虫 / small ruminant

研究概要

中国のヒツジに寄生するタイレリア原虫は日本カモシカに寄生する同原虫と近縁関係にあるため、わが国でも野生動物における保有状況を明らかにするための分子疫学調査を実施した。岐阜県内で捕獲されたカモシカ4頭の血液ならびに付着マダニ(Haemaphysalis japonicum)について、DNAを抽出し、タイレリア特異的プライマーを用いて16sRNA遺伝子をPCRで増幅したところ、マダニ試料から特異的な増幅バンドが認められ、ダニでのタイレリア原虫感染が確認できた。同血液を脾臓摘出したヒツジ2頭へ接種し、約2ヶ月間にわたり伝達性を検討したが、末梢血液中に原虫は出現せず、PCRでも陰性の結果となった。羊のバベシアについてLAMP法による検出法の検討を行った。異なる2地域から得られた2株のrRNA配列からプライマーを設計し、LAMPによるDNA増幅を試みたところ、それぞれ特異的なバンドの増幅が確認された。
新疆地域の馬におけるTrypanosoma evansi感染の実態を明らかにする目的で、LAMPでの検出を行ったところ、90%以上の高率な感染が認められた。また、甘粛省における馬バベシア感染症を調査するため、LAMPによるBabesia equi, Babesia caballiに対する検出法を開発、それぞれEMA-2、p48を標的にしたプライマーを設計し、高感度で特異性も高い検出系を開発した。これを用いて原虫検出を行ったところ、PCR陰性例からも原虫DNAを高感度に検出することが可能であった。さらにヒツジにおけるBabesia, Theileria原虫検出用LAMPを開発し、その特異性と感度を確認した。

研究成果

• [雑誌論文] Molecular characterization of Theileria orientalis piroplasma protein encoded by an open reading frame(To ORF2) in a genomic fragment. (2005)
  • 著者名/発表者名: Kim, J-Y.
  • 雑誌名: J. Vet. Med. Sci. 66・8 ページ: 957-963
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Expression of a gene encoding Trypanosoma congolense putative abc1 family protein is developmentally regulated. (2005)
  • 著者名/発表者名: Baticados, W.
  • 雑誌名: J. vet. Med. Sci. 67・2 ページ: 157-164
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Theileria orientalis : Cloning a cDNA encoding a protein similar to thiol protease with haemoglobin-binding activity. (2005)
  • 著者名/発表者名: He W
  • 雑誌名: Exp Parasitol. 111・3 ページ: 143-153
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Evaluation of loop-mediated isothermal amplification (LAMP), PCR and parasitological tests for detection of Trypanosoma evansi in experimentally infected pigs. (2005)
  • 著者名/発表者名: Thekisoe, O.
  • 雑誌名: Vet. Parasitol. 130・3-4 ページ: 327-330
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Detection of antibodies to Neospora caninum in cattle by enzyme-linked immunosorbent assay with truncated NcSRS2 expressed in Escherichia coli. (2005)
  • 著者名/発表者名: Gaturaga I
  • 雑誌名: J Parasitol 91・1 ページ: 191-192
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Molecular characterization of Theileria orientalis piroplasma protein encoded by an open reading frame (To ORF2) in a genomic fragment. (2005)
  • 著者名/発表者名: Kim, J-Y., Yokoyama, N., Kumar, S., Inoue, N., Fujisaki, K., Sugimoto, C.
  • 雑誌名: J.Vet.Med.Sci. 66-8 ページ: 957-963
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Expression of a gene encoding Trypanosoma congolense putative abc1 family protein is developmentally regulated. (2005)
  • 著者名/発表者名: Baticados, W., Witola, W.H., Inoue, N., Kim J-Y., Kuboki, N., Xuan, X., Yokoyama, N., Sugimoto
  • 雑誌名: J.Vet.Med.Sci., 2005 67-2 ページ: 157-164
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Theileria orientalis : Cloning a cDNA encoding a protein similar to thiol protease with haemoglobin-binding activity. (2005)
  • 著者名/発表者名: He W, Ohashi K, Sugimoto C, Onuma M.
  • 雑誌名: Exp Parasitol. 111-3 ページ: 143-153
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Evaluation of loop-mediated isothermal amplification (LAMP), PCR and parasitological tests for detection of Trypanosoma evansi in experimentally infected pigs. (2005)
  • 著者名/発表者名: Thekisoe, O.M.M., Inoue, N., Kuboki, N., Tuntasuvan, D., Bunnoy, W., Borisutsuwan, S., Igarashi, I., Sugimoto, C.
  • 雑誌名: Vet.Parasitol. 130-3-4 ページ: 327-330
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Detection of antibodies to Neospora caninum in cattle by enzyme-linked immunosorbent assay with truncated NcSRS2 expressed in Escherichia coll. (2005)
  • 著者名/発表者名: Gaturaga I, Chahan B, Xuan X, Huang X.Liao M, Fukumoto S, Hirata H, Nishikawa Y, Takashima Y, Suzuki H, Fujisaki K, Sugimoto C.
  • 雑誌名: J Parasitol. 91-1 ページ: 191-192
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Molecular epidemiological survey of benign Theileria parasites of cattle in Japan : detection of a new type of major piroplasm surface protein gene. (2004)
  • 著者名/発表者名: Kim, J-Y.
  • 雑誌名: J. Vet. Med. Sci. 66・3 ページ: 251-256
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Inhibitory effect of antiserum to surface antigen P50 of Babesia gibsoni on growth of parasites in severe combined immunodeficiency mice given canine red blood cells. (2004)
  • 著者名/発表者名: Fukumoto, S.
  • 雑誌名: Infect. Immun. 72・3 ページ: 1795-1798
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Expression of Babesia equi EMA-1 and EMA-2 during merozoite developmental stages in erythrocyte and their interaction with erythrocytic membrane skeleton. (2004)
  • 著者名/発表者名: Kumar, S.
  • 雑誌名: Mol. Biochem. Parasitol. 133・2 ページ: 221-227
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Growth-inhibitory effect of heparin on Babesia parasites. (2004)
  • 著者名/発表者名: Bork, S
  • 雑誌名: Antimicrob. Agents Chemother. 48・1 ページ: 236-241
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Identification of a piroplasm protein of Theileria orientalis that binds to bovine erythrocyte band 3. (2004)
  • 著者名/発表者名: Kim, J-Y.
  • 雑誌名: Mol. Biochem. Parasitol. 137・2 ページ: 193-200
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Molecular epidemiological survey of benign Theileria parasites of cattle in Japan : detection of a new type of major piroplasm surface protein gene. (2004)
  • 著者名/発表者名: Kim, J-Y., Yokoyama, N., Kumar, S., Inoue, N., Yamaguchi, T., Sentoku, S., Fujisaki, K., Sugimoto, C.
  • 雑誌名: J.Vet.Med.Sci. 66-3 ページ: 251-256
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Inhibitory effect of antiserum to surface antigen P50 of Babesia gibsoni on growth of parasites in severe combined immunodeficiency mice given canine red blood cells. (2004)
  • 著者名/発表者名: Fukumoto, S., Xuan, X., Takabatake, N., Igarashi, I., Sugimoto, C., Fujisaki, K., Nagasawa, H., Mikami, T., Suzuki, H.
  • 雑誌名: Infect.Immun. 72-3 ページ: 1795-1798
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Expression of Babesia equi EMA-1 and EMA-2 during merozoite developmental stages in erythrocyte and their interaction with erythrocytic membrane skeleton. (2004)
  • 著者名/発表者名: Kumar, S., Yokoyama, N., Kim, J-Y., Huang, X., Inoue, N., Xuan, X., Igarashi, I., Sugimoto, C.
  • 雑誌名: Mol.Biochem.Parasitol. 133-2 ページ: 221-227
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Growth-inhibitory effect of heparin on Babesia parasites. (2004)
  • 著者名/発表者名: Bork, S., Yokoyama, N., Ikehara, Y., Kumar, S., Sugimoto, C., Igarashi, I.
  • 雑誌名: Antimicrob.Agents Chemother. 48-1 ページ: 236-241
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Identification of a piroplasm protein of Theileria orientalis that binds to bovine erythrocyte band 3. (2004)
  • 著者名/発表者名: Kim, J-Y., Yokoyama, N., Kumar, S., Inoue, N., Inaba, M., Fujisaki, K., Sugimoto, C.
  • 雑誌名: Mol.Biochem.Parasitol. 137-2 ページ: 193-200
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Serodiagnosis of Neospora caninum infection in cattle by enzyme-linked immunosorbent assay with recombinant truncated NcSAG1. (2003)
  • 著者名/発表者名: Chahan, B
  • 雑誌名: Vet Parasitol. 118・3-4 ページ: 177-185
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Cloning and expression of mitochondrial heat shock protein 70 of Trypanosoma congolense and potential use as a diagnostic antigen. (2003)
  • 著者名/発表者名: Bannai, H.
  • 雑誌名: Clin, Diagn. Lab. Immunol. 10・5 ページ: 926-933
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] High-level expression of truncated surface antigen P50 of Babesia gibsoni in insect cells by baculovirus and evaluation of its immunogenicity and antigenicity. (2003)
  • 著者名/発表者名: Fukumoto, S.
  • 雑誌名: Clin. Diagn. Lab. Immunol. 10・4 ページ: 596-601
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Loop-mediated isothermal amplification for detection of African trypanosomes. (2003)
  • 著者名/発表者名: Kuboki, N
  • 雑誌名: J. Clin. Microbiol. 41・12 ページ: 5517-5524
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Molecular characterization of a gene encoding a 29-kDa cytoplasmic protein of Babesia gibsoni and evaluation of its diagnostic potentiality. (2003)
  • 著者名/発表者名: Fukumoto, S.
  • 雑誌名: Mol. Biochem. Parasitol. 131・2 ページ: 129-136
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Serodiagnosis of Neospora caninum infection in cattle by enzyme-linked immunosorbent assay with recombinant truncated NcSAG1 (2003)
  • 著者名/発表者名: Chahan B, Gaturaga I, Huang X, Liao M, Fukumoto S, Hirata H, Nishikawa Y, Suzuki H, Sugimoto C, Nagasawa H, Fujisaki K, Igarashi I, Mikami T, Xuan X.
  • 雑誌名: Vet Parasitol. 118-3-4 ページ: 177-185
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Cloning and expression of mitochondrial heat shock protein 70 of Trypanosoma congolense and potential use as a diagnostic antigen. (2003)
  • 著者名/発表者名: Bannai, H., Sakurai, T., Inoue, N., Sugimoto, C, Igarashi, I.
  • 雑誌名: Clin.Diagn.Lab.Immunol. 10-5 ページ: 926-933
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] High-level expression of truncated surface antigen P50 of Babesia gibsoni in insect cells by baculovirus and evaluation of its immunogenicity and antigenicity (2003)
  • 著者名/発表者名: Fukumoto, S., Xuan, X., Kadota, K., Igarashi, I., Sugimoto, C., Fujisaki, K., Nagasawa, H., Mikami, T., Suzuki, H.
  • 雑誌名: Clin.Diagn.Lab.Immunol. 10-4 ページ: 596-601
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Loop-mediated isothermal amplification for detection of African trypanosomes. (2003)
  • 著者名/発表者名: Kuboki, N., Inoue, N., Sakurai, T., Di Cello, F., Grab, D.J., Suzuki, H., Sugimoto, C., Igarashi, I.
  • 雑誌名: J.Clin.Microbiol. 41-12 ページ: 5517-5524
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Molecular characterization of a gene encoding a 29-kDa cytoplasmic protein of Babesia gibsoni and evaluation of its diagnostic potentiality. (2003)
  • 著者名/発表者名: Fukumoto, S., Xuan, X., Inoue, N., Igarashi, I., Sugimoto, C., Fujisaki, K., Nagasawa, H., Mikami, T., Suzuki, H.
  • 雑誌名: Mol.Biochem.Parasitol. 131-2 ページ: 129-136
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より