中国新疆地域における家畜住血原虫感染症の分子疫学的調査研究

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15405040
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 日本大学
• 研究代表者: 丸山 総一 日本大学, 生物資源科学部, 助教授 (30181829)
• 研究分担者: 玄 学南 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 助教授 (10292096) ; 壁谷 英則 日本大学, 生物資源科学部, 講師 (10318389) ; 野上 貞雄 日本大学, 生物資源科学部, 教授 (90172767) ; 土屋 耕太郎 日本生物科学研究所, 主任研究員 (70207405)
• キーワード: 中国 / 新疆地域 / 家畜 / 住血原虫 / 分子疫学 / ダニ / バベシア / エーリキア

研究概要

現地調査の結果,中国新疆地域の家畜では住血原虫感染症のみならず,種々の感染症が分布している可能性があることが判明した。したがって,次年度以降,種々の家畜についてウィルス性疾患(E型肝炎),リケッチア性疾患(エーリキア症,アナプラズマ症),細菌性疾患(レプトスピラ症,バルトネラ症,各種細菌性食中毒),原虫性疾患(トキソプラズマ症,バベシア症)などの各種疾病の起因菌を対象に,広範な疫学調査を実施する必要があるものと思われた。
また,次年度以降の広範な調査に対応すべく,以下の分子疫学的解析方法,検査法の開発等を含む基礎研究を実施した。
1)マダニ材料よりDNAを抽出し,代表的な家畜の住血微生物であるBabesia, Ehrlichia, Anaplasma各属特異的スクリーニングPCRを実施した。スクリーニング陽性検体については種特異的PCRまたは塩基配列解析を行い,感染種を決定した。その結果既知種とは異なる種が複数検出され,マダニを材料とした分子生物学的検索法は未知種の検出に効率的な方法であると考えられた。
2)バベシア,トキソプラズマ,ネオスボラなど主要動物病原原虫のcDNAライブラリーを作製し,イムノスクリーニング法によりそれぞれの主要抗原遺伝子の同定とクローニングを行った。今年度に同定・クローニングした抗原遺伝子としてB.equiのP82,EMA-2;T.gondiiのSAG2;N.caninumのSAG1;B.gibsoniのP29,P50などが挙げられる。これらの原虫抗原遺伝子を大腸菌或いは昆虫細胞発現系にて発現させ,得られた組換えタンパク質を抗原としたELISA法,イムノクロマトグラフィー法などを確立した。
3)人の腸管病原菌であるAcrobacter属菌のOne-step PCR法による同定方法を開発した。
4)肺吸虫のミトコンドリア遺伝子を用いた解析により,本種の起源や系統分類について明らかにした。
以上の基礎研究ならびに開発した各種検査法は,次年度以降の本格的な新疆地域の家畜の各種疾病の分子疫学的調査研究に資するところが大きいと期待される。

研究成果

• [文献書誌] Hirata, H., Xuan, X., Yokoyama, N., Nishikawa, Y., Fujisaki, K., Suzuki, N., Igarashi, I: "Identification of a specific antigenic region of the P82 protein of Babesia equi and its potential use in serodiagnosis."J.Clin.Microbiol. 41. 547-551 (2003)
• [文献書誌] Kabeya, H., Kobayashi, Y., Maruyama, S., Mikami, T.: "One-step polymerase chain reaction-based typing of Arcobacter species."Int.J.Food Microbiol.. 81. 163-168 (2003)
• [文献書誌] Chahan, B., Gaturaga, I., Huang, X., Min, L., Fukumoto, S., Hirata, H., Nishikawa, Y., Suzuki, H., Sugimoto, C., Igarashi, I., Mikami, T., Xuan, X.: "Serodiagnosis of Neospora caninum infection in cattle by enzyme-linked immunosorbent assay with recombinant truncated NcSAG1."Vet.Parasitol.. 118. 177-185 (2003)
• [文献書誌] Huang, X., Xuran, X., Yokoyama, N., Xu, L., Suzuki, H., Sugimoto, C., Nagasawa, H., Fujisaki, K., Igarashi, I.: "High-level expression and purification of a truncated merozote antigen-2 of Babesia equi in Escherichia coli and its potential for immunodiagnosis."J.Clin.Microbiol.. 41. 1147-1151 (2003)
• [文献書誌] Huang, X., Xuan, X., Hirata, H., Yokoyama, N., Xu, L., Suzuki, N., Igarashi, I.: "A rapid immunochromatographic test with recombinant SAG2 for the detection of antibodies against Toxoplasma gondii in cats."J.Clin.Microbiol.. 42. 351-353 (2003)
• [文献書誌] Fukumoto, S., Xuan, X., Inoue, N., Igarashi, I., Sugimoto, C., Fujisaki, K., Nagasawa, H., Mikami, T., Suzuki, H.: "Molecular characterization of a gene encoding 29 kDa cytoplasmic protein of Babesia gibsoni and evaluation of its diagnostic potentiality."Mol.Biochem.Parasitol.. 131. 129-136 (2003)
• [文献書誌] Fukumoto, S., Xuan, X., Kadota, K., Igarashi, I., Sugimoto, C., Fujisaki, K., Nagasawa, H., Mikami, T., Suzuki, H.: "High-level expression of truncated major surface antigen P50 of Babesia gibsoni in insect cells by baculovirus and evaluation of its immunogenicity."Cin.Diagn.Lab.Immunol.. 10. 596-601 (2003)
• [文献書誌] Inokuma, H., Yoshizaki, Y., Shimada, Y., Sakata, Y., Okuda, M., Onishi, T.: "Epidemiological survey of Babesia species in Japan performed with specimens from ticks collected from dogs and detection of new Babesia DNA closely related to Babesia odocoilei and Babesia divergens DNA"J.Clin.Microbiol.. 41. 3494-3498 (2003)
• [文献書誌] Inokuma, H., Beppu, T., Okuda, M., Shimada, Y., Sakata, Y.: "Epidemiological survey of Anaplasma platys and Ehrlichia canis using ticks collected from dogs in Japan."Vet Parasitol. 115. 343-348 (2003)
• [文献書誌] Agatsuma, T., Iwagami, M., Sato, Y., Iwashita, J., Hong, S.J., Kang, S.Y., Ho, L.Y., Su, K., Kawashima, K., Abe, T.: "The origin of the triploid in Paragonimus westermani on the basis of variable regions in the mitochondrial DNA."J.Helminthol.. 77. 279-285 (2003)