| 研究課題/領域番号 |
15510165
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| 研究機関 | 熊本大学 |
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研究代表者 |
入江 厚 熊本大学, 大学院・医学薬学研究部, 助手 (30250343)
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| 研究分担者 |
西村 泰治 熊本大学, 大学院・医学薬学研究部, 教授 (10156119)
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| キーワード | プロテオーム / PKC / T細胞 / リン酸化タンパク / Maldi法 / ナノスプレー / ZAP-70 / シグナル伝達経路 |
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| 研究概要 |
これまで、T細胞は厳密に抗原を認識し応答すると考えられていたが、アゴニストの1アミノ酸残基を他に置換したアンタゴニストであっても、抗原提示細胞表面に人為的に過剰発現させることにより、野生型アゴニストに特異的なヒトT細胞クローンに強い増殖応答を誘導できることを見いだした。このT細胞増殖応答は、従来TCRを介した抗原刺激のシグナル伝達に必須であると考えられていたチロシンリン酸化酵素ZAP-70の活性化を伴わないユニークなものであった。種々の阻害剤を用いた増殖応答に対する阻害効果を調べた結果、このT細胞増殖応答にはPKCの一種であるPKCμが関与することが示唆された。実際に過剰発現させたアンタゴニストの刺激で増殖するT細胞においてPKCμは活性化されており、ZAP-70に依存しないT細胞活性化経路の存在が示唆された。
PKCμには、類似した構造を有し同一のファミリーを構成する分子が、他に2種類存在することが知られている。そこで今回見いだしたT細胞の活性化に関わるPKCμの分子種を同定するため、T細胞の可溶性画分から抗PKCμ抗体により特異的に単離されるタンパク質を、Qstarを用いたMaldi法による高感度質量分析により同定を試みている。
さらにPKCμ以外に、この未知のT細胞活性化経路に関わる分子を網羅的に同定することを目的に、野性型アゴニストまたは過剰発現させたアンタゴニストで刺激したT細胞、および無刺激のT細胞それぞれの可溶性画分からリン酸化タンパク質を調製し、それぞれを2次元電気泳動法により展開し、観察されるタンパク質スポットを、Qstarを用いたナノスプレー法により分析を行った。その結果、40種以上のリン酸化タンパク質を同定し、各刺激間で出現するタンパク質量に差の生ずるものを数種認めた。
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