研究課題
基盤研究(C)
これまで、T細胞は厳密に抗原を認識し応答すると考えられていたが、抗原ペプチドの1アミノ酸残基を他に置換した類似抗原ペプチドであっても、抗原提示細胞表面に人為的に過剰発現させることにより、野生型抗原による刺激と同程度の強い増殖応答をT細胞に誘導できることを見いだした。この現象は、自己の組織に、抗原ペプチドと酷似したアミノ酸配列を持つペプチドが存在すると、それにより誤ったT細胞の活性化が誘導され自己免疫疾患等の疾病の原因となる可能性を示唆する。種々の阻害剤を用いた増殖応答に対する阻害効果を調べた結果、このT細胞増殖応答にはPKCの一種であるPKCμが関与することが示唆された。実際に過剰発現させた当該類似抗原ペプチドの刺激で増殖するT細胞においてPKCμは活性化されており、このT細胞の活性化機構に関与することが示された。T細胞活性化機構におけるPKCμの役割を調べる目的で、Qstarを用いたMaldi法による高感度質量分析を行ったところ、ヒトおよびマウスのT細胞においてPKCμは検出されず、PKCμ活性の主体はこれと類似した構造を有するPKD2(protein kinase D2)がであることが明らかとなった。蛍光蛋白質で標識したPKD2をヒトT細胞株に強制発現させこれを刺激すると、T細胞の活性化に伴いPKD2の一部は核に移行することを見出した。そこで、ヒトT細胞の核抽出物を用い、PKD2により特異的にリン酸化される蛋白質をプロテオーム解析を行ったところ、3種類の蛋白質を同定した。これらはいずれもPKCμのリン酸化モチーフ(Leu/Ile-X-X-X-X-Ser)を有する物であり、現在その機能を解析中である。またPKCμ以外に、この未知のT細胞活性化経路に関わる分子を網羅的に同定することを目的に、野性型抗原ペプチドまたは過剰発現させた類似抗原ペプチドで刺激したT細胞、および無刺激のT細胞それぞれの可溶性画分からリン酸化タンパク質を調製し、それぞれを2次元電気泳動法により展開し、観察されるタンパク質スポットを、Qstarを用いたナノスプレー法により分析を行つた。その結果、40種以上のリン酸化タンパク質を同定し、各刺激間で出現するタンパク質量に差の生ずるものを数種同定した。
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