研究課題
基盤研究(C)
アンカリング蛋白質CG-NAPは中心体およびゴルジ体に局在するコイルドコイル蛋白質である。CG-NAPめゴルジ体における機能の解析を目指して、ゴルジ体局在機構を解析し、またそのゴルジ体局在を阻害してゴルジ体形成および小胞輸送系への影響を検討した。1.免疫染色法による観察よりCG-NAPはG2期後期からゴルジ体への局在が弱まり、Prophaseに入ると残存するゴルジ体断片から完全に解離した。2.CG-NAPの各種欠失変異体の細胞内局在を解析しアミノ末端領域がゴルジ体局在を司ることを見出した。この領域が分裂期特異的なリン酸化によりゴルジ体から解離する可能性について検討を行ったところin vitroでP1kにより効率よくリン酸化された。3.CG-NAPのゴルジ体局在領域を過剰発現させると内在性CG-NAPは中心体に残りゴルジ体からは解離することを見出した。この条件下で各種ゴルジ体蛋白質の局在を調べたところコントロールと比較して分断化された形態を示し、ゴルジ体の分断化が示唆された。また、発現させたGFP融合ゴルジ体マーカー蛋白質をライブイメージングにより観察したところ不安定な動きを示した。次に、小胞輸送系への影響をVSV-Gtsの輸送により検討したところ、小胞体〜ゴルジ体〜細胞膜への移行は阻害されなかった。しかしその速度は異なる可能性があり詳しい解析を行っている。4.RNAiによるCG-NAPの発現抑制を試みたところ、ゴルジ体局在は低下するが中心体には残る傾向がみられた。このような細胞で上記と同様にゴルジ体形成、小胞輸送の検討を行ったところ類似した現象が観察された。以上より内在性のCG-NAPがゴルジ体から解離すると、ゴルジ体の中心体近傍へ形成(輸送、融合、維持等のいずれか)が不完全で分断化されると考えられ、この過程にCG-NAPが関わる可能性が示唆された。
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