| 研究課題/領域番号 |
15590161
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
解剖学一般(含組織学・発生学)
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| 研究機関 | 長崎大学 |
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研究代表者 |
和泉 伸一 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助手 (40264246)
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| 研究分担者 |
小路 武彦 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (30170179)
高野 邦雄 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (80050029)
菱川 善隆 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教授 (60304276)
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| 研究期間 (年度) |
2003 – 2004
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| キーワード | 転写因子 / 遺伝子発現 / 組織化学 / エストロゲン / プロラクチン / pit-1 / DNA / 核 |
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| 研究概要 |
1.血液由来のエストロゲン作用物質がプロラクチン(PRL)細胞のエストロゲン受容体(ER)およびPit-1を介してPRL遺伝子の発現を促進するかをin vivoで検討した。正常マウスのジエチルスチルベストロール(DES)投与群では、下垂体のPRLおよびPit-1陽性細胞の増数が、またFSH/LH陽性細胞の減少が認められた。ERαは正常マウスの対照群のPRLおよびFSH/LH細胞の核に認められたが、DES投与群のPRL陽性細胞ではERαは濃度依存性に減少し、替わってERβが濃度依存性に誘導され増加した。ERαノックアウトの対照群では、PRL細胞の核にはERβが存在し、DES投与によるERβ、PRLあるいはFSH/LH陽性細胞数には変化がなかった。したがって、正常マウスにDESを投与するとPRL遺伝子の転写の促進があり、そのときPRL産生細胞の核にPit-1が増加するのみならずERβとERαの増減と置換があり、転写調節因子の量と質が調節されていることが示唆された。
2.PRLを産生するGH3培養細胞における核内転写因子の量の人為的調節効果をin vitroで検討した。Pit-1が結合するPRL遺伝子の調節エレメント(1P)をあらかじめ合成し標識した核酸プローブを細胞外から核内に導入して、Pit-1の1Pへの結合部位をブロックしたときに、PRL遺伝子の転写が抑制されるか否かを、Pit-1およびERの核内分布との関係で検討した。Pit-1およびERの核内分布をSouthwestern組織化学法および酵素抗体法の光学および電子顕微鏡レベルで検出する技法の確立を検討した結果、シグナルの増加にはいずれもオートクレープの前処理が有効であり、pit-1およびERが核の異染色質に近い正染色質に分布するGH3培養細胞はPRLをその細胞質に保有していた。このことは、GH3培養細胞では、転写因子Pit-1およびERはPRL遺伝子が転写し得る核内部位に局在していることを示唆している。合成核酸プローブの最適な導入濃度および導入後の時間は検討中である。
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