| 研究概要 |
チミジンホスホリラーゼ(TP)はチミヂンをチミンと2-デオキシリボース-1-リン酸に可逆的に変換する酵素であり、多くの癌でその発現が上昇することが報告されている。TPは癌の増殖、浸潤、転移、腫瘍血管新生と深く関わっている。一方、TPはマクロファージにも高く発現していることが確認されており生体の免疫反応にも何らかの関わりをもつと考えられた。我々はTPの腫瘍免疫および抗炎症における機能、腫瘍増殖、腫瘍血管新生、腫瘍浸潤における機能を解析したいと考えた。すでにTPノックアウトマウスの方がリステリア菌を投与した場合に,免疫反応を抑制するサイトカインであるIL-10産生が低いことを確認している。
本研究では
1)マクロファージによって傷害をうけるEL-4 lymphoma細胞をTPノックアウトマウスに移植した場合は野生型にくらべて顕著にその増殖が抑えられることを確認した。
2)U937細胞に野生型、変異型TPのcDNAをトランスフェクトし過剰発現株を得た。LPSで刺激した場合したあとIL-10mRNAの発現をリアルタイムPCRで調べTP過剰発現細胞株で親株細胞より高く発現することを確認した。
3)TPタンパクのモチーフ検索を行ったところロイシンジッパーモチーフが確認された。
4)COS細胞にIL-10のプロモーターを含むルシフェラーゼ遺伝子とイTP cDNAをトランスフェクトし、TPたんぱくがIL-10のプロモーター活性に及ぼす影響を調べたが明確な上昇は確認できなかった。
5)HA-tagをつけたTPの過剰発現細胞株を作った。
6)浸潤を担うと考えられているMMPの発現を調べたところ膀胱癌細胞細胞EJ, BTにTPを過剰発現させたEJ/TP, BT/TP細胞はベクターを発現させた細胞に比べMMP9の発現に差が見られなかった。
浸潤性の膀胱癌細胞ではTPの影響がみられないと考えられた。
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