2003 年度実績報告書

オステオポンチン蛋白多型の機能的差異を規定するドメインの解析

研究課題

研究課題/領域番号	15590346
研究機関	愛媛大学
研究代表者	宮崎龍彦愛媛大学, 医学部, 助手 (80239384)
研究分担者	能勢眞人愛媛大学, 医学部, 教授 (70030913)
キーワード	オステオポンチン / 蛋白多型 / 無細胞蛋白合成システム / 構造解析 / サイトカイン / 蛋白機能解析 / コンジェニックインブレッド / 糸球体腎炎
研究概要	申請者らは、オステオポンチン(OPN)蛋白多型が膠原病疾患群の発症・進展にどのような機序で関連するかについて明らかにするため、以下の解析を行った。 1.OPN蛋白多型の構造解析と結合能差異の解析 (1)無細胞蛋白合成システムによる合成OPN多型蛋白の作成:MRL/Mp系およびC3H/HeJ系マウス由来のOpn cDNAをもとに、無細胞蛋白合成システムによりMRL型およびC3H型のオステオポンチンを合成した。 (2)合成OPNの蛋白性状の解析:上記で合成したOPNの性状をSDS-PAGE, Western blotを用いて解析した。 2.機能差異誘導ドメインの同定 (1)PCR based site directed mutagenesisによる改変合成蛋白の作成:PCR based site directed mutagenesisの手法を用い、C3H型のOpn cDNAを操作し、アミノ酸置換を一カ所MRL型OPNと同じにした改変合成蛋白を作成した。同様にMRL型のOpn cDNAを操作した合成蛋白も同様に作成した。 (2)改変合成蛋白の構造解析:これら合成蛋白を用いて1.(2)項と同様の解析を行った。 (3)合成多型OPNによる脾細胞、および骨髄由来マクロファージに対するサイトカイン分泌誘導の定量的解析:マウスの脾細胞および骨髄由来マクロファージを採取し、改変合成OPNを種々の濃度で加えて培養、時間軸を追って細胞を採取し、RT-PCRにより蛋白多型によるサイトカイン発現誘導能の差異を解析した。 3.OPN遺伝子座特異的コンジェニックマウスの作成 [MRL/lpr×(MRL/lprかけるc3H/lpr)F1]-N2マウスを作成し、5番染色体のOpn遺伝子座領域がC3H型となっている個体を選別した。これをさらにMRL/lprと戻し交配を繰り返し、コンジェニックインブレッドマウスを第9世代まで作成した。

研究成果

(5件)

すべてその他

すべて文献書誌 (5件)

[文献書誌] Yamada, A., Miyazaki, T., Ito, M.R., Nose, M., et al.: "Genetic basis of tissue-specificity of vasculitis in MRL/lpr mice"Arthritis and Rheumatism. 48・5. 1445-1451 (2003)
[文献書誌] Fujii, H., Ito, M.R., Miyazaki, T., Nose, M.et al.: "Internalization of antibodies by endothelial cell s via fibronectin implicating a novel mechanism in Lupus nephritis"Kidney International. 64・5. 1662-1670 (2003)
[文献書誌] Ito, M.R., Ono, M., Itoh, J., Nose M.: "Bone marrow transfer of autoimmune diseases in an MRL strain of mice with a deficit in functional Fas ligand : Dissociation of arteritis from glomerulonephritis"Pathology International. 53・8. 518-524 (2003)
[文献書誌] Hasegawa, H., Ito, M.R., Nose, M., et al.: "Antagonist of Monocyte Chemoattractant Protein 1 ameliorates the initiation and progression of lupus nephritis and renal vasculitis in MRL/lpr mice"Arthritis and Rheumatism. 48・9. 2555-2566 (2003)
[文献書誌] 能勢眞人: "【血管炎研究がめざす新たな展開】血管炎のゲノミクス"医学のあゆみ. 206・2. 140-142 (2003)

2003 年度 実績報告書

オステオポンチン蛋白多型の機能的差異を規定するドメインの解析

研究代表者

宮崎 龍彦 愛媛大学, 医学部, 助手 (80239384)

研究成果

[文献書誌] Yamada, A., Miyazaki, T., Ito, M.R., Nose, M., et al.: "Genetic basis of tissue-specificity of vasculitis in MRL/lpr mice"Arthritis and Rheumatism. 48・5. 1445-1451 (2003)

[文献書誌] Fujii, H., Ito, M.R., Miyazaki, T., Nose, M.et al.: "Internalization of antibodies by endothelial cell s via fibronectin implicating a novel mechanism in Lupus nephritis"Kidney International. 64・5. 1662-1670 (2003)

[文献書誌] Ito, M.R., Ono, M., Itoh, J., Nose M.: "Bone marrow transfer of autoimmune diseases in an MRL strain of mice with a deficit in functional Fas ligand : Dissociation of arteritis from glomerulonephritis"Pathology International. 53・8. 518-524 (2003)

[文献書誌] Hasegawa, H., Ito, M.R., Nose, M., et al.: "Antagonist of Monocyte Chemoattractant Protein 1 ameliorates the initiation and progression of lupus nephritis and renal vasculitis in MRL/lpr mice"Arthritis and Rheumatism. 48・9. 2555-2566 (2003)

[文献書誌] 能勢眞人: "【血管炎研究がめざす新たな展開】血管炎のゲノミクス"医学のあゆみ. 206・2. 140-142 (2003)

2003 年度実績報告書

宮崎龍彦愛媛大学, 医学部, 助手 (80239384)