新規核蛋白H2RSPの機能解析と消化管粘膜上皮の再生修復における役割

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15590351
• 研究機関: 宮崎大学(医学部)
• 研究代表者: 伊藤 浩史 宮崎大学, 医学部, 助教授 (80253847)
• 研究分担者: 片岡 寛章 宮崎大学, 医学部, 教授 (10214321) ; 秋山 裕 宮崎大学, 医学部, 助手 (00347056)
• キーワード: HGF / HGF activator inhibitor (HAI) / HAI-2 related small peptide (H2RSP) / Gastrointestinal mucosa / Cell growth / Cell differentiation / In situ hybridization / immunohistochemistry

研究概要

Hepatocyte growth factor activator inhibitor (HAI) type 2-Related Small Peptide (H2RSP)は、肝細胞増殖因子(HGF)の特異的活性化因子HGF activator (HGFA)の調節因子であるHAI-2のSplicing variantを検索する過程で我々が発見したアミノ酸106個からなる新規ペプチドで、EGFP癒合蛋白によるin vitroの解析で核移行シグナルを持っていることをこれまで報告してきた。今年度はまず、このH2RSP遺伝子の消化管上皮細胞における発現を免疫組織学的、およびIn situ hybridization法によって検討した。ヒトH2RSP全長とGSTとの癒合蛋白を作製し、アフィニティーカラムによってリコンビナントH2RSPを精製、ウサギに免疫して抗ヒトH2RSPポリクローナル抗体を作製した。消化管上皮細胞ではH2RSP蛋白はCryptでは主に細胞質に染色されるのに対し、Foveolarでは核のみに染色された。炎症性腸疾患である潰瘍性大腸炎や胃潰瘍の症例では、潰瘍辺縁の再生粘膜で、まさに上皮細胞が増殖、遊走している部位ではH2RSP蛋白は核ではなく細胞質に留まったまま高発現していた。大腸癌組織ではこのような部位による局在の変化は認められず不規則な発現をしており、また症例によって発現量の差が認められた。In situ hybridization法においても、H2RSP mRNAは正常消化管上皮では、主にCryptの増殖帯の細胞に局在しているのに対し、癌組織では部位に関係なく不規則に局在していた。以上のことから、H2RSPは消化管上皮細胞の増殖分化に関連するシグナルの一部を担っているではないかと推測され、癌組織ではそのシグナル伝達が乱されていることが考えられた。次年度は、核移行後のH2RSPの機能について、GSTとの癒合蛋白や免疫沈降法を利用し、H2RSPにAssociateする蛋白を検討する。また、マウスH2RSP遺伝子をクローニングしたので(BBRC 302:345-353(2003))、H2RSPノックアウトマウスの作製も並行して進めていく。

研究成果

• [文献書誌] Kataoka H, Tanaka H, nagaike K, Uchiyama S, Itoh H: "Roles of cancer-stroma interaction in invasive growth of cancer cells"Human Cell. 16. 1-14 (2003)
• [文献書誌] Naganuma S, Itoh H, Uchiyama S, Tanaka H, Nagaike K, et al.: "Characterization of transcripts generated from mouse hepatocyte growth factor activator type 2 (HAI-2) and HAI-2 related small peptide (H2RSP) genes"Biochem.Biophys.Res.Commun. 302. 345-353 (2003)
• [文献書誌] Yamauchi M, Kataoka H, Itoh H, Seguchi T, Hasui Y, et al.: "Hepatocyte growth factor activator inhibitor type 1 (HAI-1) and type 2 (HAI-2) are eypressed by epithelium in kidney and downregulated in renal cell carcinoma"J.Urology. 171. 890-896 (2004)