リンパ球ホーミングを司る高内皮細静脈に特異的な接着制御の分子機構

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15590437
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 田中 稔之 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (30217054)
• キーワード: 高内皮細静脈(HEV) / リンパ球ホーミング / L-セレクチン / L-セレクチンリガンド / endomucin / ローリング / 糖鎖修飾 / HEV-2

研究概要

【目的】高内皮細静脈(high endothelial venule : HEV)はリンパ節とパイエル板に限局して存在する特異な小静脈で、リンパ球との特異的な接着反応を通じてリンパ球ホーミングを制御している。本研究では独自に行ったHEVの遺伝子発現解析の結果に基づき、HEVに特異的な接着制御機構の解明を試みる。【結果と考察】1:L-セレクチンリガンドを形成する新しいコア蛋白質の特定と機能的再構成:新しいシアロムチンendomucin・コア蛋白質をL-セレクチン結合性糖鎖の生合成に必要な糖転移酵素群(フコース転位酵素VII, L-selectin ligand sulfotransferase,コア2転移酵素など)とともにCHO細胞に遺伝子導入し、endomucinにL-セレクチン結合性糖鎖を再構成した。この再構成endomucinのL-セレクチンリガンド活性を遺伝子導入CHO細胞のL-セレクチン上でのローリング反応を指標に解析した。その結果、特異的な糖鎖修飾によりendomucinはL-セレクチンリガンド活性を獲得することが示され、endomucinがL-セレクチン結合性糖鎖をL-セレクチンに提示する新しいシアロムチンコアタンパク質であることが示された。2:HEVに発現するIgドメインとムチンドメインを持つ新規分子の機能:遺伝子発現プロファイル解析を通じて、HEVにイムノグロブリン(Ig)ドメインとムチンドメインをもつ細胞膜貫通型の新規分子(HEV-2)が発現することを見いだし、全長cDNAを単離した。可溶性HEV-2を作製し、HEV-2のIgドメインおよびムチンドメインを特異的に認識するモノクローナル抗体を作製した。得られた抗HEV-2抗体を用いた解析の結果、HEV-2は末梢リンパ節HEVに発現するがパイエル板HEVには発現しないことが示された。また、上記(1)と同様な方法でムチンドメインを持つHEV-2がL-セレクチン結合性糖鎖修飾をうけることを見いだした。現在、HEV-2遺伝子破壊マウスの作製にむけ、targetingベクターの作製を進めている。

研究成果

• [文献書誌] ^*Ebisuno, Y., ^*Tanaka, T.et al.(^*equal contribution): "Cutting Edge : The B cell chemokine CXCL13/B-lymphocyte chemoattractant is expressed in the high endothelial venules of lymph nodes and Peyer's patches and affects B cell trafficking across high endothelial venules"Journal of Immunology. 171. 1642-1646 (2003)
• [文献書誌] Tanaka, T.et al.: "Expression of chemokines and chemokine binding molecules in high endothelial venules that mediate lymphocyte homing into lymph nodes and Peyer's patches"Microcirculation Annual. 19. 3-6 (2003)
• [文献書誌] ^*Kashiwazaki, M., ^*Tanaka, T.et al.(^*equal contribution): "A high endothelial venule-expressing promiscuous chemokine receptor DARC can bind the inflammatory but not lymphoid chemokines and is dispensable for lymphocyte homing under physiological conditions"International Immunology. 15. 1219-1227 (2003)
• [文献書誌] Nagakubo, D.et al.: "A high endothelial venule secretory protein, mac25/angiomodulin, interacts with multiple high endothelial venule-associated molecules including chemokines"Journal of Immunology. 171. 553-561 (2003)
• [文献書誌] Kabashima, K.et al.: "Thromboxane A_2 modulates interaction of dendritic cells and T cells and regulates acquired immunity"Nature Immunology. 4. 694-701 (2003)