| 研究課題/領域番号 |
15590489
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
片岡 幹男 岡山大学, 医学部, 教授 (50177391)
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| 研究分担者 |
柴倉 美砂子 岡山大学, 医学部, 助手 (30314694)
石川 哲也 岡山大学, 医学部, 助教授 (90221754)
倉園 久生 岡山大学, 医学部, 教授 (90186487)
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| キーワード | サルコイドーシス / Propoinibacterium acnes / Propionibacterium granulosum / 気管支肺胞洗浄 / リアルタイム PCR |
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| 研究概要 |
1.気管支肺胞洗浄細胞(BAL細胞)および血清の採取
岡山大学医学部附属病院呼吸器外来にて診断したサルコイドーシス(サ症)患者22例に気管支鏡検を実施し、気管支肺胞洗浄細胞を採取するとともに血清の採取を行った.
2.BAL細胞中のプロピオニバクテリア属ゲノムのリアルタイムPCR法による定量解析
P.acnes及びP.granulosumの16 S ribosomal RNAの塩基配列より、P.acnesについてはアンプリコンサイズが182bp、P.granulosumについては102hpのForwardおよびReverseプライマーとそれぞれのPCR増幅産物にハイブリダイズするように設計したTaqManプローブを作成した.P.acnes(ATCC 6919株)、P.granulosum(ATCC 11829株)の培養菌体よりQIAamp DNA Mini Kitを用いてDNAを抽出し、作成したプライマーによりLight Cycler中でPCR反応を行い、threshold cycle数(Ct値)を読み取り、定量性の検討を行った.菌体DNAの希釈系列を作成し、Ct値を求めたところ、Ctと菌体DNA量との間には負の相関が認められた.この標準曲線を用いて、サ症患者22例と対照疾患として肺癌患者8例、間質性肺炎患者7例のBAL細胞より抽出した検体を用いて、ゲノムの定量を行った.P.acnesについてはサ症22例で、対照疾患に比し有意に多数のゲノムの存在が確認された.
3.血清抗P.acnes及びP.granulosum抗体検出のためのAntibody-capture EIA法の構築
本年度はP.acnes(ATCC 6919株)、P.granulosum(ATCC 11829株)の培養菌体の超音波破砕物を超遠心し、EIA用抗原液を作成した.来年度はこれを用いて、P.acnes、P.granulosumに対する家兎血清を作製し、抗P.acnes、抗P.granulosum血清抗体を高感度に測定できるEIA法を確立する予定である.
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