アダプター分子SH2-Bの脂肪細胞におけるインスリン情報伝達系を介した分化の制御

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15590522
• 研究機関: 立命館大学
• 研究代表者: 鈴木 健二 立命館大学, 理工学部, 教授 (10187726)
• キーワード: 脂肪細胞 / チロシンキナーゼ / アダプタータンパク質 / 細胞内情報伝達

研究概要

ヒトSH2-Bの大腸菌を用いた発現
脂肪細胞の分化にともなうSH2-Bタンパク質発現量の変化を調べるために特異的抗体の作成を計画した。まずヒトSH2-BのcDNAをpTrcHisベクターにサブクローニングし、大腸菌JM109を形質転換した。pTrcHisは外来性タンパク質をmycとポリヒスチジンのふたつのタグとの融合タンパク質として発現させるベクターである。Chelathig Sepharose(ニッケルカラム)と市販の抗myc抗体を用いて、大腸菌粗抽出液よりSH2-B融合タンパク質の精製を行っている。
脂肪細胞分化とSH2-Bスプライシングバリアントの発現量の変化
マウス3T3-L1細胞はインスリンとデキサメサゾン、IBMXの添加により8日から2週間で脂肪細胞へと分化する。α-,β-,γ-,δ-SH2-B mRNAの発現量の変動を、細胞の分化段階に対応させて検討するため、PPARγ,HSL(hormone sensitive lipase),LPL(lipoprotein lipase),FABP(fatty acid binding Protein),leptin,TNFαに対するRT-PCR用の特異的プライマーセットをデザインし、さらに増幅の条件を検討した。
3T3-L1細胞への遺伝子導入
pcDNAベクターを用いて、3T3-L1細胞にSH2-Bの野生型および変異型cDNAを導入し、脂肪細胞分化への影響をOilRedO染色と脂肪細胞特異的遺伝子群の発現を指標に調べている。

研究成果

• [文献書誌] Suzuki, K. et al.: "Genetic variation in hypoxia-inducible factor 1-alpha and its possible association with high altitude adaptation in Sherpas."Med.Hypotheses. 61(3). 385-389 (2003)
• [文献書誌] Kimoto, K. et al.: "Gliciazide protects pancreatic beta-cells from damage by hydrogen peroxide."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 303(1). 112-119 (2003)
• [文献書誌] Sekine, Y. et al.: "Effects of Nutrient and Food Intake on Calcaneous Bone Mass among Healthy Japanese Women in the Predelivery and Postpartum Periods"J.Women Health. 12(7). 643-653 (2003)
• [文献書誌] Hitomi, Y. et al.: "Intermittent Hypobaric Hypoxia Increases the Ability of Neutrophils to Generate Superoxide Anion in Humans."Clin.Exp.Pharmacol.Physiol.. 30(9). 659-664 (2003)
• [文献書誌] Ohno, H. et al.: "Physical Exercise and Extracellulrar Superoxide ismutase : Antiatherogenic Effects."Adv.Exerc.Sports Physiol.. 9(2). 45-53 (2003)
• [文献書誌] Miyazaki, H. et al.: "Effect of Eccentric Exercise on Neutrophil Function in Human Plasma."Adv.Exerc.Sports Physiol.. 9(2). 69-75 (2003)