自己免疫疾患臓器特異性を決定する腸内細菌特異抗原の同定と慢性大腸炎モデルの開発

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15590627
• 研究機関: 東京医科歯科大学
• 研究代表者: 金井 隆典 東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 講師 (40245478)
• 研究分担者: 日比 紀文 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (50129623) ; 八木田 秀雄 順天堂大学, 医学部, 助教授 (30182306) ; 渡辺 守 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (10175127)
• キーワード: 炎症性腸疾患 / 調節製T細胞 / 腸管粘膜免疫 / 単クローン / 慢性大腸炎モデル / 自然免疫 / 腸内細菌 / 自己免疫疾患

研究概要

1)自然免疫系障害は粘膜免疫組織に存在する調節性T細胞に影響を及ぼすか否か
(1)腸内細菌に共通の自然免疫系認識機構であるMyD88-Toll-like受容体分子の欠損マウス(MyD88欠損マウス、TLR2、TLR4、TLR9欠損マウス)における脾臓、大腸粘膜内リンパ球より、CD4+CD25+T細胞は正常マウス同様にin vitroで調節性T細胞機能を有した。
(2)(1)より分離した調節性T細胞を、CD4+CD45RBhigh移入大腸炎モデルにおいて、共移入したところ、正常マウスCD4+CD25+T細胞に比較して、MyD88欠損CP4十CD25+T細胞の腸炎発症抑制能は有意に低下し、腸炎を発症した。
2)Single Propia T Cell Transfer (SPTC) Colitisの確立と抗原の同定
BALB/cマウスCD4+CD45RBhigh移入大腸炎炎症局所よりCD4陽性T細胞を単離し、1×10^4個を再びSCIDマウスに移入し大腸炎を作成した。同様の操作を繰り返し、病的CD4陽性T細胞のin vivoでの継代を行った。さらに、継代に際し、正常BALB/cマウス脾臓樹状細胞にCD4+CD45RBhigh移入大腸炎発症マウス大腸内糞便ホモジェネートし腸内細菌抗原をパルスし、病的CD4陽性T細胞のセレクションをおこなった。継代に際し、より早く激しく腸炎を発症するマウスを選択した。6代継代後、得られたT細胞クローンのVb領域のPCRを施行し、3匹にClonalityを確認した。種々得られたT細胞クローンを再度、BALB/c Rag-2欠損マウスに移入し継代中である。さらに、SPTC Colitisは正常マウスCD4+CD25+T細胞の共移入により腸炎発症抑制制御されることを確認した。得られた、腸炎発症病的CD4+T細胞は腸内細菌抗原パルス樹状細胞とIL-2とIL-7添加培養液にてin vitroでのT細胞クローンを2クローン樹立し、in vitroにおける単クローンメモリー細胞のCD4+CD25+T細胞での制御を検討中である。
現在、腸炎を発症した個体より、炎症局所、脾臓、リンパ節よりT細胞を単離、T細胞受容体遺伝子のクローニングを行っている。

研究成果

• [文献書誌] Totsuka T, Kanai T, et al.: "Ameliorating effect of anti-inducible co-stimulator monoclonal antibody in a murine model of chronic colitis."Gastroenterology. 124. 410-421 (2003)
• [文献書誌] Ezaki T, Kanai T, et at.: "A specific genetic alteration on chromosome 6 in ulcerative colitis-associated colorectal cancers."Cancer Res. 63. 3747-3749 (2003)
• [文献書誌] Uraushihara K, Kanai T, et al.: "Regulation of murine inflammalory bowel disease by CD25+ and CD25-CD4+ glucocorticoid-induced TNF receptor family-related gene+ regulatory T cells."J Immunol. 171. 708-716 (2003)
• [文献書誌] Yanazaki M, Kanai T, et al.: "Mucosal T cells exoressing high levels of IL-7 receptor are potential targets for treatment of chronic colitis."J Immunol. 171. 1556-1563 (2003)
• [文献書誌] Kanai T, et al.: "Blockade of B7-H1 suppresses the development of chronic intestinal inflammation."J Immunol. 171. 4156-4163 (2003)
• [文献書誌] Dan N, Kanai T, et al.: "Preventive effects of chronic colitis in CD4^+CD45RB^+T cell-transferred SCID mice by anti-FasL mAb administration."Am J Physiol GI & Liver. 285. 754-760 (2003)