ヒト肝癌の転移および増殖に関わるケモカイン・ケモカインレセプターの解析

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15590674
• 研究機関: 京都府立医科大学
• 研究代表者: 伊藤 義人 京都府立医科大学, 医学部研究科, 講師 (70244613)
• キーワード: 肝癌 / ケモカイン / ケモカインレセプター / 転移 / 増殖

研究概要

1)real time PCRおよびflow cytometryによる解析
5種類の肝癌細胞株とChang liver cellを用いて、10種類のCCケモカインレセプター、6種類のCXCケモカインレセプター、XC, CX3Cケモカインレセプターの合計18種類のケモカインレセプターのmRNA発現をreal time PCR法で検討した。その中で、CXCケモカインレセプターCXCR4はChang liver cellとPLC/PRF/5(Al)で強く発現しており、CCケモカインレセプターCCR6はHuH7、Al、HepG2で強く発現していた。次に、細胞表面に表出されたレセプターをflow cytometerで検討した。real time PCRでCXCR4 mRNA発現の多かったChang liver cellとAlではCXCR4が強く表出されており、HuH7やHepG2でもCXCR4の表出が確認できたが、HLEやHLFでは表出は見られなかった。
次に、CCR6の発現を検討したが、real time PCRでmRNA発現量の多かったHuH7、Al、HepG2の三種類の細胞では、同様に、CCR6が強く表出されていた。
2)ケモカインレセプターの表出とケモカインの産生
CXCR4のリガンドであるSDF-1をRT-PCR法で検討したところ、HuH7、Al、HepG2の三種類の細胞でSDF-1のmRNAの発現がみられた。さらに、Alの培養上清ではSDF-1がELISAで確認された。同様に、CCR6のリガンドであるMIP-3αのmRNAの発現はHuH7、Al、HepG2の三種類の細胞で確認され、その三種類のcell lineの培養上清ではMIP-3αがELISAで確認された。
以上より、HuH7では、MIP-3αとそのレセプターCCR6が発現していることが示されたので、HuH7をMIP-3α存在下で培養し、MTT assayを行うと、濃度依存性に細胞増殖の亢進がみられ、肝癌細胞でもCCR6-MIP-3αを介してケモカインがautoまたはparacrineに働き、細胞増殖に働く可能性があると考えれた。

研究成果

• [文献書誌] Kasahara A, Itoh Y, et al.: "Interferon treatment improves survival in chronic hepatitis C patients showing biochemical"J Viral Hepat. 11(2). 148-156 (2004)
• [文献書誌] Okanoue T, Itoh Y, et al.: "Lamivudine therapy for Japanese patients with cirrhosis B"Intervirology. 46(6). 394-399 (2003)
• [文献書誌] Yamaguchi K, Itoh Y, et al.: "Engineered long terminal repeats of retroviral vectors nhance transgene expression in hepatocytes in vitro and in vivo"Mol Ther. 8(5). 796-803 (2003)
• [文献書誌] Morita A, Itoh Y, et al.: "Activated Kupffer cells play an important brole in intra-hepatic Th1-associated necro-inflamation in Concanavalin A-induced hepatic injury in mice"Hepatol Res. 27(2). 143-150 (2003)