| 研究課題/領域番号 |
15590678
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| 研究機関 | 奈良県立医科大学 |
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研究代表者 |
福井 博 奈良県立医科大学, 医学部, 教授 (80145838)
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| 研究分担者 |
藤本 正男 奈良県立医科大学, 医学部, 助手 (60295805)
美登路 昭 奈良県立医科大学, 医学部, 助手 (10382285)
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| キーワード | エンドトキシン / Toll-like受容体 / マクロファージ / Kupffer細胞 / アルコール性肝障害 / 多臓器不全 |
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| 研究概要 |
平成16年度は前年度の問題であったラット各種マクロファージ(Mφ)(Kupffer細胞、脾Mφ、肺胞Mφ)のTLR4発現検出のための最適条件を徹底的に検討した。当初、細胞分画をTRIzol試薬で処理して総RNAを抽出する方法を取っていたが、これでは各種マクロファージから安定した収量のRNAを得にくく、内部標準としたβ-actin発現にもばらつきがみられた。このために種々工夫を加え、最終的にRN easy Mini Kitを用いることにより細胞収量をあげ、さらに安定した総RNA量の抽出のためにコラーゲンコートしたdishとplateを使用して安定した量の総RNA抽出が可能となった。次に各マクロファージの細胞数を5x10^5にそろえた場合、Kupffer細胞のTLR4 mRNA発現が非常に少なく検討しにくかったことから、Kupffer細胞については最大細胞数でも同時に実験を行うこととした。続いて、コントロールラットおよび急性エタノール投与ラットからマクロファージを採取してTLR4 mRNA発現、TNF-αmRNA発現を対比検討した。コントロールラットでは脾マクロファージ、肺胞マクロファージのTLR4mRNA発現、TNF-αmRNA発現は、Kupffer細胞に比して強く、LPS添加によりTNF-αmRNA発現は増強し、TLR4mRNA発現は減弱する傾向に合ったが、急性エタノール投与ラットでは一定の傾向が得られなかった。続いてガラクトサミン投与急性肝不全ラットでCD14 mRNAも加えて検討したところ、CD14とTNF-αmRNAは平行して動く傾向にあるが、TLR4 mRNAはこれらとは関係なく動き、肝障害の程度によりdynamicに変動することが判明した。来年度は慢性エタノール投与ラットにおける検討を追加し、急性肝不全ラットと対比しながらTLR4 mRNAの動態解析を行いたい。
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