2003 年度実績報告書

リボザイムによる腎疾患の遺伝子治療の開発

研究課題

研究課題/領域番号	15590863
研究機関	日本大学
研究代表者	福田昇日本大学, 医学部, 講師 (40267050)
研究分担者	松本紘一日本大学, 医学部, 教授 (00125064)
キーワード	PDGF-A鎖 / TGF-β1 / リボザイム / アデノウイルス / 慢性腎炎
研究概要	1.PDGF-A鎖mRNAおよびTGF-β1 mRNAに対するDNA/RNAキメラ型リボザイムの合成 RNase耐性のため、リボザイムの酵素活性をもった保存配列のみRNA構造とし、他をDNA構造とし、3'末端の2塩基をphosphorothioate型に化学修飾したDNA/RNAキメラ型リボザイムをRNA、DNAシンセサイザーを用いて合成し、HPLCにて精製した。 2.PDGF-A鎖mRNAおよびTGF-β1 mRNAに対するリボザイム発現アデノウイルスの構築コスミドベクターへPDGF-A鎖mRNAおよびTGF-β1 mRNAに対するリボザイムの鋳型DNAを挿入する。構築したコスミドの大量調製し、制限酵素処理済みDNA-TPCとを293細胞にco-transfectionした。目的の組換えウイルスが得られたかどうか確認を行った後、組換えウイルスを293細胞に感染させて高力価ウイルス液を得、力価測定し保存した。 3.腎メサンジウム細胞培養メサンジウム細胞を分離、培養し、基礎レベルでtotal RNAを抽出し、PDGF-A鎖およびTGF-β1 mRNA発現をRT-PCR法にて測定した。 4.生体内分解型ゼラチンによるリボザイムのデリバリーの検討 PDGF-A鎖mRNAおよびTGF-β1 mRNAに対するDNA/RNAキメラ型リボザイムをFITCラベルし、1μgを生体分解型ゼラチンと30分インキュベートしリボザイムを包埋する。培養腎メサンジウム細胞に0.1μMリボザイムのみ、リボザイム+ゼラチンをインキュベートし、細胞への取り込み効率を比較した。

研究成果

(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Kotani M, Fukuda N, et al.: "Chimeric DNA-RNA hammerhead ribozyme targeting to PDGF A-chain mRNA specifically inhibited neointimal formation of rat carotid artery after balloon"Cardiovascular Research. 57. 265-276 (2003)
[文献書誌] Hu WY, Fukuda N, et al.: "Homogenous cultures of human-derived vascular smooth muscle cells produce angiotensin II by changing to the synthetic phenotype."Journal of Cell Physiology. 196. 284-292 (2003)
[文献書誌] Fukuda N, Furuya R et al.: "Effects of antisense PNA to PDGF A-chain on growth of vascular smooth muscle cells."Journal of Cardiovascular Pharmacology. 42. 224-231 (2003)
[文献書誌] Bando T, Iida H, Tao ZF, Narita A, Fukuda N, et al.: "Sequence specificity, reactivity, and antitumor activity of DNA-alkylating pyrrole-imidazole diamides."Chemical Biology. 10. 751-758 (2003)
[文献書誌] Ando H, Fukuda N, et al.: "Chimeric DNA-RNA hammerhead ribozyme targeting TGF-β1 mRNA inhibits neointima formation in rat carotid artery after balloon injur"European Journal of Pharmacology. 483. 207-214 (2004)
[文献書誌] Ikeda Y, Fukuda N, et al.: "Development of angiogenic cell and gene therapy by transplantation of umbilical cord blood with vascular endothelial growth factor gene."Hypertension Research. 27. 119-128 (2004)
[文献書誌] 横山真一郎, 福田昇: "血管の発生と新生-基礎と臨床-"メディカルレビュー社. 12 (2003)

2003 年度 実績報告書

リボザイムによる腎疾患の遺伝子治療の開発

研究代表者

福田 昇 日本大学, 医学部, 講師 (40267050)

研究成果

[文献書誌] Kotani M, Fukuda N, et al.: "Chimeric DNA-RNA hammerhead ribozyme targeting to PDGF A-chain mRNA specifically inhibited neointimal formation of rat carotid artery after balloon"Cardiovascular Research. 57. 265-276 (2003)

[文献書誌] Hu WY, Fukuda N, et al.: "Homogenous cultures of human-derived vascular smooth muscle cells produce angiotensin II by changing to the synthetic phenotype."Journal of Cell Physiology. 196. 284-292 (2003)

[文献書誌] Fukuda N, Furuya R et al.: "Effects of antisense PNA to PDGF A-chain on growth of vascular smooth muscle cells."Journal of Cardiovascular Pharmacology. 42. 224-231 (2003)

[文献書誌] Bando T, Iida H, Tao ZF, Narita A, Fukuda N, et al.: "Sequence specificity, reactivity, and antitumor activity of DNA-alkylating pyrrole-imidazole diamides."Chemical Biology. 10. 751-758 (2003)

[文献書誌] Ando H, Fukuda N, et al.: "Chimeric DNA-RNA hammerhead ribozyme targeting TGF-β1 mRNA inhibits neointima formation in rat carotid artery after balloon injur"European Journal of Pharmacology. 483. 207-214 (2004)

[文献書誌] Ikeda Y, Fukuda N, et al.: "Development of angiogenic cell and gene therapy by transplantation of umbilical cord blood with vascular endothelial growth factor gene."Hypertension Research. 27. 119-128 (2004)

[文献書誌] 横山真一郎, 福田 昇: "血管の発生と新生-基礎と臨床-"メディカルレビュー社. 12 (2003)

2003 年度実績報告書

福田昇日本大学, 医学部, 講師 (40267050)

[文献書誌] 横山真一郎, 福田昇: "血管の発生と新生-基礎と臨床-"メディカルレビュー社. 12 (2003)