| 研究課題/領域番号 |
15590943
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
代謝学
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| 研究機関 | 徳島大学 |
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研究代表者 |
吉本 勝彦 徳島大学, 大学院・ヘルスバイオサイエンス研究部, 教授 (90201863)
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| 研究分担者 |
水澤 典子 徳島大学, 大学院・ヘルスバイオサイエンス研究部, 助手 (80254746)
赤松 徹也 徳島大学, 大学院・ヘルスバイオサイエンス研究部, 助手 (80294700)
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| 研究期間 (年度) |
2003 – 2004
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| キーワード | 膵β細胞 / セリンプロテアーゼ / エンドソーム |
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| 研究概要 |
マウス膵β細胞株MIN6細胞から大規模なcDNA塩基配列の決定を行った。これらのcDNAを順次ノーザン解析することにより、組織特異的発現を解析した。その結果、膵β細胞でのみ発現する1種の遺伝子を単離し、isletasinと名付けた。
isletasin遺伝子産物は552個のアミノ酸からなる。isletasin蛋白はN末端に21個のアミノ酸よりなる疎水性部分とセリンプロテアーゼのcatalyhc triadとしてのヒスチジン、アスパラギン酸、セリン(HDS)の3残基を2箇所に有するというユニークな構造を有するが、活性化に必要な開裂部位のアミノ酸配列が保存されていないため、プロテアーゼ活性を有する可能性は少ないと考えられる。また予備的な実験では、本遺伝子産物にはプロテアーゼ活性は検出されなかった。またラットホモログをラット膵β細胞株INS-1細胞より単離した。マウスとラット間におけるアミノ配列の一致性は94.8%であった。5'-RACE法にて転写開始点は翻訳開始点から38bp上流であることを確認した。遺伝子発現をreal-time RT-PCRで検討したところ、MIN6細胞、βHC9細胞、INS-1細胞、マウスおよびラット単離膵島に高い発現を認めた。
COS-7細胞にisletasin遺伝子を導入して解析した結果より、シグナルペプチドが切断されること、およびN-グリコシル化を受ける糖蛋白であることを明らかにした。また細胞膜画分の炭酸ナトリウム処理、Triton X-114処理、proteinase K処理の結果より、isletasinはマイクロソーム画分の内腔側で膜に強固に接して存在する蛋白であることを明らかにした。また、isletasinと緑色蛍光蛋白との融合遺伝子あるいはHis-mycのタグを付加したisletasinを用いた実験においては、緑色蛍光蛋白のシグナルが初期エンドソームのマーカーのシグナルと重なりを示している部分が認められた。
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