抗アポトーシス分子アナモルシンと造血制御

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15591006
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 柴山 浩彦 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (60346202)
• 研究分担者: 水木 満佐央 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (80283761) ; 松村 到 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (00294083) ; 金倉 譲 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (20177489)
• キーワード: アナモルシン / 抗アポトーシス / 二次造血 / ノックアウトマウス / DNAマイクロアレイ / Bcl-xL / Jak2

研究概要

サイトカインにより発現が誘導される新規の抗アポトーシス分子をクローニングし、アナモルシン(AM)と名付けた。AMのin vivoでの機能を明らかにする目的にて、AMノックアウト(KO)マウスを作製し、そのフェノタイプを解析した。AM KOマウスは、著明な貧血を認め、妊娠後期に胎生致死となる。AM KOマウスの胎児肝は、コントロールの野生型マウスの胎児肝に比べて細胞数は約3分の1に減少しており、また、胎児肝での赤芽球系細胞のアポトーシスの亢進と成熟障害が認められ、多染性赤芽球以降の分化、成熟した赤芽球はほとんど認められなくなる。表面マーカーの検索の結果などから、胎児肝にある造血前駆細胞の絶対数は減少していない。しかし、胎児肝細胞を用いたin vitroコロニーアッセイにおいては、BFU-E、CFU-Mixなどの造血コロニーは全く形成されなかった。以上の結果から、AMは胎児肝での二次造血過程において、サイトカインによる造血シグナルに必須の分子であることが明らかとなった。
次に、AMの作用機序を明らかにする目的にて、AM KOマウスと野生型マウスの胎児肝細胞から抽出したmRNAを用いて、DNAマイクロアレイ解析を行った。その結果、アポトーシスやシグナル伝達関連分子の中で、Bcl-xLとJak2の発現がAM KOマウスの胎児肝において有意に減少していることが明らかとなった。このことは、RT-PCR法によっても確認された。Bcl-xLやJak2の遺伝子欠損マウスにおいても、二次造血不全に伴う貧血がみられることから、AMの機能は、Bcl-xLやJak2を介している可能性が示唆された。今後、AM欠損造血細胞に、Bcl-xLやJak2を補うことで血球のアポトーシスの回避あるいは成熟、分化が回復するかどうか検討することによって、AMとBcl-xLあるいはJak2の関係がよりはっきりすると考えられた。

研究成果

• [文献書誌] H.Shibayama, et al.: "Identification of a cytokine-induced antiapoptotic molecule Anamorsin essential for definitive hematopoiesis"J.Exp.Med.. 199(4). 581-592 (2004)
• [文献書誌] Y.Okawa, et al.: "Purification of N-termianlly truncated histone H2A-monoubiquitin conjugates from leukemic cell nuclei probable proteolytic products of ubiquitinated H2A"Int.J.Biochem.Cell Biol.. 35(11). 1588-1600 (2003)
• [文献書誌] Y.Kataoka, et al.: "Reciprocal inhibition between MyoD and STAT3 in the regulation of growth and differentiation of myoblasts"J.Biol.Chem.. 278(45). 44178-44187 (2003)
• [文献書誌] A.Kawasaki, et al.: "Opposing effects of PML and PML/RAR alpha on STAT3 activity"Blood. 101(9). 3368-3373 (2003)
• [文献書誌] X.Zhang, et al.: "Constitutively activated Rho guanosine triphosphatases regulate the growth and morphology of hairy cell leukemia cells"Int.J.Hematol.. 77(3). 263-273 (2003)
• [文献書誌] K.Hashimoto, et al.: "Necessity of tyrosine 719 and PI-3'-kinase-mediated signal pathway in constitutive activation of c-kit receptor tyrosine kinase with Asp 814 Val mutation"Blood. 101(3). 1094-1102 (2003)