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本年度は、マウスのGMF-gamma(以下GMFG)のgenomic DNAの解析を進めた。また、凍結によって作成した脳損傷モデルラットを用いて、損傷後の脳組織におけるGMF-beta(以下GMFB)の発現変化を検討した。
[1]GMFG genomic DNAの解析:
マウスGMFGのgenomic DNAをクローニングし、塩基配列を決定した。その結果、ヒトと同様、マウスもGMFGは7つのexonより構成されることが判明した。Promoter部位はTATA lessで、housekeeping gene様のGC rich promoterであった。ルシフェラーゼアッセイによりエンハンサー領域の解析を行った。また、転写開始点が数カ所あり、現在解析を進めている。
[2]ラット脳凍結損傷モデルにおけるGMFBの発現変化:
Wistar系ラットの大脳皮質に凍結損傷を作成し、損傷後のGMFBの発現変化をRT-PCR、Western Blot、免疫組織化学、EIAを用いて検討した。抗体は、昨年度確立したラットGMFB対する特異的抗体を用い、また、タンパクの定量には、この抗体を使用したEIA系を用いた。その結果、GMFBは、損傷周囲の反応性アストロサイトに強く発現していた。mRNAは、損傷後7日で上昇し、14日をピークに以降減少した。GMFBタンパクの発現は、損傷後1日で上昇し、14日をピークに以降減少した。これらの結果から、脳損傷後の修復過程においてGMFBが何らかの役割を担っていることが考えられた。
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