2003 年度実績報告書

神経変性疾患治療用マウスES細胞由来培養細胞株の樹立と治療研究

研究課題

研究課題/領域番号	15591125
研究機関	大阪市立大学
研究代表者	田中あけみ大阪市立大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (30145776)
研究分担者	前田光代大阪市立大学, 大学院・医学研究科, 講師 (40122080)
キーワード	ES細胞 / グリア前駆細胞 / 細胞治療 / ライソゾーム病 / β-ガラクトシダーゼ欠損マウス / 遺伝性神経変性疾患
研究概要	細胞を介して物質を脳内に補填することを主眼とした脳治療を目指し、これに適した治療用細胞株の樹立を目的として研究を始めた。ES細胞をグリア前駆細胞に分化させることに成功した。ES細胞は、LIFを除いてinsulin、transferrin、fibronectinを加え培養し、embryoid bodyを形成する。その後、トリプシン処理にて細胞をばらばらにし、insulin、transferrin、progesterone、putrescine、lamininを加えて培養を続ける。これをサブカルチャーした後、basic fibroblast growth factor(FGF2)とepidermal growth factor(EGF)とを加えて培養する。これをさらにサブカルチャーし、FGF2とplatelet-derived growth factor(PDGF)を毎日添加しながら培養すると、突起の形成が始まる。この細胞をA2B5、GFAP、04などに対する抗体染色にて分化を判定する。グリア前駆細胞に分化した細胞を欠損酵素の補填のため、ライソゾーム病モデルマウスである生後2週間のβ-ガラクトシダーゼ欠損マウスの脳室内に投与した。脳内への細胞の生着を確認するため、投与1週間後にマウスを屠殺し、脳組織切片を用いてβ-ガラクトシダーゼ活性染色とβ-ガラクトシダーゼmRNAに対するin situ hybridizationを行い、さらに脳組織を各部分に分けて各々のβ-ガラクトシダーゼ活性を測定した。いずれの方法においても、投与した細胞の生着を確認できなかった。理由は、方法の感度によるものか、投与した細胞が死滅してしまったのか不明であった。

研究成果

(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Tanaka A, Hoang TNL, Nishi Y, Maniwa S, Oka M, Yamano T: "Different attenuated phenotypes of GM2 gangliosoidosis variant B in Japanese patients with HEXA mutations at codon 499, and five novel mutations responsible for infantile acute form"J Hum Genet. 48. 571-574 (2003)
[文献書誌] Matsuzawa F, Aikawa S, Sakuraba H, Hoang TNL, Tanaka A, Ohno K, Sugimoto Y, Ninomiya H, Doi H: "Structural basis of the GM2 gangliosidosis B variant"J Hum Genet. 48. 582-589 (2003)
[文献書誌] Takaura N, Yagi T, Maeda M, Nanba E, Oshima A, Suzuki Y, Yamano T, Tanaka A: "Attenuation of ganglioside GM1 accumulation in the brain of GM1 gangliosidosis mice by neonatal intravenous gene transfer"Gene Therapy. 10. 1487-1493 (2003)
[文献書誌] Maeda M, Ohba N, Nakagomi S, Suzuki Y, Kiryu-Seo S, Namikawa K, Kondoh W, Tanaka A, Kiyama H: "Vesicular acetylcholine transporter can be a morphological marker for the reinnervation to muscle of regenerating mortor axons"Neuroscience Res. 48. 305-314 (2004)
[文献書誌] 田中あけみ: "胎児期に発生した疾患の遺伝カウンセリングと予後-先天性代謝異常症"周産期医学. 33. 1157-1159 (2003)
[文献書誌] 田中あけみ, 高浦奈津子: "ガングリオシドーシス(GM1ガングリオシドーシスおよびGM2ガングリオシドーシス)"小児内科. 35. 445-460 (2003)

2003 年度 実績報告書

神経変性疾患治療用マウスES細胞由来培養細胞株の樹立と治療研究

研究代表者

田中 あけみ 大阪市立大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (30145776)

研究成果

[文献書誌] Tanaka A, Hoang TNL, Nishi Y, Maniwa S, Oka M, Yamano T: "Different attenuated phenotypes of GM2 gangliosoidosis variant B in Japanese patients with HEXA mutations at codon 499, and five novel mutations responsible for infantile acute form"J Hum Genet. 48. 571-574 (2003)

[文献書誌] Matsuzawa F, Aikawa S, Sakuraba H, Hoang TNL, Tanaka A, Ohno K, Sugimoto Y, Ninomiya H, Doi H: "Structural basis of the GM2 gangliosidosis B variant"J Hum Genet. 48. 582-589 (2003)

[文献書誌] Takaura N, Yagi T, Maeda M, Nanba E, Oshima A, Suzuki Y, Yamano T, Tanaka A: "Attenuation of ganglioside GM1 accumulation in the brain of GM1 gangliosidosis mice by neonatal intravenous gene transfer"Gene Therapy. 10. 1487-1493 (2003)

[文献書誌] Maeda M, Ohba N, Nakagomi S, Suzuki Y, Kiryu-Seo S, Namikawa K, Kondoh W, Tanaka A, Kiyama H: "Vesicular acetylcholine transporter can be a morphological marker for the reinnervation to muscle of regenerating mortor axons"Neuroscience Res. 48. 305-314 (2004)

[文献書誌] 田中あけみ: "胎児期に発生した疾患の遺伝カウンセリングと予後-先天性代謝異常症"周産期医学. 33. 1157-1159 (2003)

[文献書誌] 田中あけみ, 高浦奈津子: "ガングリオシドーシス(GM1ガングリオシドーシスおよびGM2ガングリオシドーシス)"小児内科. 35. 445-460 (2003)

2003 年度実績報告書

田中あけみ大阪市立大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (30145776)