| 研究概要 |
本研究では、志賀毒素(Stx)産生型腸管出血性大腸菌感染による溶血性尿毒性症候群(HUS)に伴う急性脳症(HUS脳症)の発症機序に関する基礎的研究を、大脳毛細血管内皮細胞による血液・脳関門モデルを用いて行っている。
(目的)
(1)Stx刺激による培養大脳毛細血管内皮細胞でのIL-8,MCP-1などのケモカイン発現と、ケモカインが白血球付着・移行能やGb3発現能に与える影響を検討する。
(2)同細胞培養系で、抗IL-8抗体、抗MCP-1抗体の抗ケモカイン抗体を用いて、白血球付着・移行能やGb3発現能とStxの関与を検討する。
(3)Stxがケモカイン発現に関与する転写因子NF-κBに与える影響を検討する。
今年度は、血液・脳関門細胞モデルの準備実験として、臍帯静脈血管内皮細胞を用いて、まず細胞培養系を確立した。Stx刺激でIL-8、MCP-1などのケモカインを誘導することを確認するために、培養液をELISA法で測定し、ケモカインの上昇を認めた。
また、Stx刺激有無で培養した細胞からtotal RNAを抽出し、IL-8,MCP-1でのノーザンブロツト法を行い、有意な発現の確認を行った。
現在、細胞培養から核内抽出分を抽出キットを用いて、行っている。今後、転写因子NF-κB活性化の検討を行っている。
本来のモデルである大脳毛細血管内皮細胞の取得が現在難しく、関連機関、企業と検討中である。
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