2003 年度実績報告書

マトリックスメタロプロテイネイス-9発現調節を介した皮膚疾患治療への基礎的研究

研究課題

研究課題/領域番号	15591169
研究機関	千葉大学
研究代表者	小林孝志千葉大学, 医学部附属病院, 講師 (90234830)
研究分担者	輪千浩史星薬科大学, 薬学部, 講師 (50318614)
キーワード	マトリックスメタロプロテイネイス / MMP-9 / MMP-2 / TIMP-1 / TIMP-2 / DRF-1 / KRE-M9 / TPA responsive element
研究概要	マトリックスメタロプロテイネイス(matrix metalloproteinase (MMP))-9が異常角化や炎症時に発現、promoter中のKRE-M9がrepressorとして、differentiation repressing factor (DRF)-1と結合し組織代謝に関わることが研究代表者により見い出されており、MMP-9および関連分子の発現を制御して皮膚疾患を治療するための基礎的研究を行った。 1.Decoy治療の可能性についての検討-培養ヒトケラチノサイト(KC)、ヒト線維肉腫細胞株(HT1080)にKRE-M9および4塩基置換させたKRE-M9(S4)を含むoligonucleotide(ON)を添加、遺伝子導入させ、MMP-9およびその関連分子発現について検討した。結果、アニーリングさせた2本鎖ONでは、KRE-M9(S4)導入と比較して、KRE-M9導入細胞では、MMP-9発現の増加を認め、アポトーシス反応の増強を認めた。しかし1本鎖では、むしろ逆の結果となり、DRF-1が2本鎖のdecoy ONと結合する反面、1本鎖ではむしろ核内でDRF-1がより働く可能性があり、現在、原因をさらに検討中である。 2.RNAiによる治療についての検討-DRF-1、MMP-9、もう一種のジェラチネイスであるMMP-2、またMMPsの生体内inhibitorであるtissue inhibitor of metalloproteinases (TIMP)-1、2およびヒトに存在しないgreen fluorescence protein (GFP)について各々25塩基対の2本鎖RNAを作成、KCおよびHT1080に対して遺伝子導入した。GFPをコントロールとしたRNAiの結果、DRF-1についてはMMP-9発現の増加とアポトーシス反応の増強、MMP-2、9ではアポトーシスの減弱、逆にTIMP-1、2では増強反応を認めた。 3.Leptomycin B投与治療についての検討-本剤によりKC由来MMP-9発現がpromoter中のKRE-M9とTRE、また他領域を介しMMP-2と比較して選択的に抑制され、これは炎症性サイトカインやKC分化刺激時でも生じることを確認した。

研究成果
(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Kobayashi T.: "In situ detection of gelatinolytic activity in skin specimens of squamous cell carcinoma : Probable role in dyskeratosis and tumor invasion."Dermatology. 206・3. 281-283 (2003)
[文献書誌] Kobayashi T., Hattori S., et al.: "Matrix metalloproteinases-2 and -9 are secreted from human fibroblasts."Acta Derm Venereol. 83・2. 105-107 (2003)
[文献書誌] Onoue S., Kobayashi T., et al.: "Induction of matrix metalloproteinase-9 secretion from human keratinocytes in culture by ultraviolet B irradiation."J Dermatol Sci. 33・1. 105-111 (2003)
[文献書誌] Kobayashi T., Kishimoto J., et al.: "Matrix metalloproteinase 9 expression is coordinately modulated by the KRE-M9 and 12-o-tetradecanoyl-phorbol-13-acetate responsive elements."J Invest Dermatol. 122・2. 278-285 (2004)
[文献書誌] Kobayashi T.: "MMP-9 and TIMP-1 assays in keratinocyte cultures."Methods Mol Biol. (in press). (2004)
[文献書誌] 小林孝志: "最新皮膚科学体系第10巻「内分泌・代謝異常症脂肪組織疾患形成異常症異物沈着症」内真皮結合組織代謝異常線維成分異常"中山書店. 12 (2003)

2003 年度 実績報告書

マトリックスメタロプロテイネイス-9発現調節を介した皮膚疾患治療への基礎的研究

研究代表者

小林 孝志 千葉大学, 医学部附属病院, 講師 (90234830)

研究成果

[文献書誌] Kobayashi T.: "In situ detection of gelatinolytic activity in skin specimens of squamous cell carcinoma : Probable role in dyskeratosis and tumor invasion."Dermatology. 206・3. 281-283 (2003)

[文献書誌] Kobayashi T., Hattori S., et al.: "Matrix metalloproteinases-2 and -9 are secreted from human fibroblasts."Acta Derm Venereol. 83・2. 105-107 (2003)

[文献書誌] Onoue S., Kobayashi T., et al.: "Induction of matrix metalloproteinase-9 secretion from human keratinocytes in culture by ultraviolet B irradiation."J Dermatol Sci. 33・1. 105-111 (2003)

[文献書誌] Kobayashi T., Kishimoto J., et al.: "Matrix metalloproteinase 9 expression is coordinately modulated by the KRE-M9 and 12-o-tetradecanoyl-phorbol-13-acetate responsive elements."J Invest Dermatol. 122・2. 278-285 (2004)

[文献書誌] Kobayashi T.: "MMP-9 and TIMP-1 assays in keratinocyte cultures."Methods Mol Biol. (in press). (2004)

[文献書誌] 小林孝志: "最新皮膚科学体系 第10巻「内分泌・代謝異常症 脂肪組織疾患 形成異常症 異物沈着症」内 真皮結合組織代謝異常 線維成分異常"中山書店. 12 (2003)

2003 年度実績報告書

小林孝志千葉大学, 医学部附属病院, 講師 (90234830)

[文献書誌] 小林孝志: "最新皮膚科学体系第10巻「内分泌・代謝異常症脂肪組織疾患形成異常症異物沈着症」内真皮結合組織代謝異常線維成分異常"中山書店. 12 (2003)