| 研究課題/領域番号 |
15591365
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| 研究機関 | 日本大学 |
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研究代表者 |
天野 定雄 日本大学, 医学部, 講師 (80159459)
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| 研究分担者 |
柏尾 光彦 日本大学, 医学部, 助手 (20343577)
青木 信彦 日本大学, 医学部, 講師 (70318393)
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| キーワード | VEGF-C / 末梢性浮腫 / リンパ管新生 / 遺伝子導入 / 乳癌術後 |
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| 研究概要 |
平成15年度に行っている研究は
1)遺伝子導入に使用するプラスミドの調整:HL60白血病細胞から調整したcDNA libraryから単離したhuman VEGF-Cを用意し、CMVプロモーター領域をふくむmammalian expressionベクター(プラスミド)の中へ重合した。
2)プラスミドDNAの培養細胞へのtransfection:プラスミドDNAをtransfection reagentとともに内皮細胞株や乳癌腫瘍細胞株にtransfectionし、培養細胞液の上清でVEGF-Cの蛋白の発現をELISAにて確認し、プラスミドDNAの有効性の確認作業を行っている。VEGF-Cを発現していない食道癌、乳癌など5種の腫瘍細胞でtransfection後にVEGF-Cの発現蛋白を測定し、乳癌細胞株C-SST2株で微量なVEGF-Cの発現が得られた、さらにtransfectionの方法や細胞株の種類を変えて検討している。
3)プラスミドDNAを注入した部位の検討
当初、プラスミドDNAを直接ラットの皮下に注入することを予定していたが、皮膚や皮下組織への注入効率に問題があると考え、注入方法の再検討を行っている。その際新しい方法として、皮膚、筋肉組織などの体表にプラスミドDNAを注入するのに有用とされている、in vivo electroporationによる方法を試みる準備をしている。すなわち、遺伝子導入装置(CUY21EDIT)による)を用いてVEGF-C、VEGF familyの単独投与や混合投与をいろいろな条件で行い、注入部位や全身臓器の組織を採取し、VEGF-CやVEGF familyの遺伝子や蛋白が発現していることをRT-PCR、サザンブロット法、免疫染色などで確認する予定である。
また実際にリンパ管組織が局所で増生していることを確認する方法として、VEGFR3,LYEV-1などの抗体で動物モデルの組織の免疫染色を行い、さらに我々が作成したFLT-4 antisense mRNAによるISHの実験中である。
なお、100例あまりの比較的早期の乳癌患者を対象にしてリンパ節転移にVEGF-Cの発現が有意に関与していることを臨床例から証明し、論文とした。
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