| 研究課題/領域番号 |
15591398
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
梛野 正人 名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (20237564)
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| 研究分担者 |
新井 利幸 名古屋大学, 医学部附属病院, 助手 (80335041)
小田 高司 名古屋大学, 医学部附属病院, 助手 (30311715)
二村 雄次 名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (80126888)
西尾 秀樹 名古屋大学, 医学部附属病院, 助手 (30345897)
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| キーワード | 門脈枝塞栓術 / 肝再生 / 血管内皮 / 伸展刺激 / IL-6 / NF-κB / IKKα |
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| 研究概要 |
われわれはこれまでに門脈枝塞栓術後に非塞栓葉の門脈枝径が約1.5倍に拡張し、それに伴い血管内皮細胞が持続伸展刺激を受けることに注目し、肝類洞内皮細胞にin vitroで持続牽引刺激を加えることによりIL-6が分泌され、これが肝再生のtriggerになっている可能性について報告してきた。今回は持続伸展刺激に対する血管内皮細胞からのIL-6分泌のシグナル機構を知る目的で転写因子であるNF-κBに注目した研究を行った。【材料および方法】ファイブロネクチンをコートしたシリコンゴム製のチャンバーにヒト臍帯内皮細胞(HUVECs)を培養し、チャンバーを牽引することにより細胞に持続牽引刺激を加えた。培養液中のIL-6濃度、IL-6 mRNAの発現、NF-κBの活性化などについて検討した。【結果】(1)持続牽引刺激の強度とIL-6産生の時間経過:細胞に1.25倍、1.5倍の一方向持続牽引刺激を加え、上清中のIL-6濃度変化の時間経過を調べた。牽引後最初の6時間でIL-6の分泌が亢進し、濃度上昇の速度は徐々に対照群と近づいた。また牽引度を強くすると上清中IL-6濃度が上昇した。(2)持続牽引刺激に対するIL-6 mRNA発現の時間経過:IL-6 mRNAの発現は持続牽引刺激後2時間でpeakとなり徐々に減衰した。(3)IL-6 mRNAの発現に対する牽引時間の効果:様々な牽引時間に対するIL-6 mRNAの発現を調べた。IL-6 mRNAの発現は牽引時間5分、30分では上昇しなかったが、60分から上昇し90分でpeakとなり120分で減衰した。(4)持続牽引刺激に対するNF-κBの活性化:抗NF-κB P65/RelA抗体を用い免疫染色をおこなうと、牽引後1時間でNF-κBの核への集積を認めた。次にNF-κBの活性化を見るためにIκBのリン酸化酵素であるIKKαの活性化をkinase assayで調べると、牽引後5分後から徐々に活性化し、15分でpeakとなり徐々に減衰した。以上の結果より、血管内皮細胞の持続牽引刺激に対するIL-6の産生にはNF-κBを介するシグナル経路が重要であることが明らかとなった。
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