| 研究課題/領域番号 |
15591479
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
吉野 一郎 九州大学, 大学院・医学研究院, 助教授 (40281547)
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| 研究分担者 |
山口 正史 九州大学, 大学病院, 助手 (20316160)
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| キーワード | Macrophage migration inhibitory factor / 炎症性サイトカル / 肺癌 / 喫煙関連化学物質 / 癌性胸膜炎 |
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| 研究概要 |
1 肺癌細胞株おけるMIFの発現の有無の検索
ヒトの由来の肺癌細胞株(扁平上皮癌株QG56、腺癌株PC-9、小細胞癌株QG90)よりRNAを抽出し、Cdnaを調整後、下記のoligoprimerを用いてRT-PCRを行い、MIFの遺伝子発現を確認した。
2 臨床検体におけるMIFの発現の有無の検索
59症例の切除肺より採取し、凍結保存した非癌部肺、腫瘍組織についてRNAを抽出し、real time monitoring PCR法にてMIFのRNA量(/0.08μg)を定量したところ、癌部で144078コピーと非癌部の25438コピーより有意に高かった(p<0.0001)。これは喫煙者で有意に高く(喫煙者肺癌26例152372コピー、非喫煙者腺癌18例86065コピー、p=0.0402)、喫煙とMIF発現の相関が示唆された。また、腫瘍内浸潤リンパ球を酵素法および抗体カラム法にて分離し、同様にMIFの遺伝子発現および無刺激培養48時間の培養情勢中のMIF蛋白をELISA法にて測定したところ、腫瘍内浸潤リンパ球にも明らかなMIFの発現が認められた。
3 MIFの発現と喫煙について
上記実験結果より、喫煙関連化学物質がMIFの発現に関連している可能性が示唆された為、肺癌細胞株A549の培養液にtobacco smokeあるいはbenz(o)pyreneを添加したところ、培養後48時間、14週間、28週間においてA549にMIF蛋白の発現が認められた。また同じ刺激系にてp53蛋白、p21蛋白の発現およびリン酸化が認められた。現在、MIFの上流のMAP kinaseの活性化について更に解析中である。
4 MIFの発現阻止実験
MIFの遺伝子発現をcomputer解析にてデザインした2種類のMIF-siRNAをlipofection法にて各種肺癌細胞株への導入を行ったところ、1種では阻止効果が認められず、他種にて試行する予定である。
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