| 研究課題/領域番号 |
15591578
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
村松 慶一 山口大学, 医学部附属病院, 助手 (10322249)
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| 研究分担者 |
重冨 充則 山口大学, 医学部附属病院, 助手 (30284251)
伊原 公一郎 山口大学, 医学部附属病院, 助教授 (90184788)
河合 伸也 山口大学, 医学部, 教授 (70034965)
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| キーワード | 四肢移植 / 免疫寛容 / キメリズム / トランスゲニックラット / PCR / 運動器 |
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| 研究概要 |
小林英司先生等(自治医科大学臓器置換研究部)が開発したGFP transgenic rat (green fluorescent protein wister rat)を譲り受け、本動物実験施設にて、female Wister rat (wild type)と交配し、hetero type F1約100匹を得た。このF1を用いてまずGFP transgenic ratの特性を調査した。GFPは、489nm程度の励起光を照射すると、特有の緑色蛍光色を呈する。袴田ら(自治医科大学動物資源開発プロジェクト)の報告では、GFP geneをtransgeneされたラットは、ユビキタス(至る所)に緑色蛍光を発し、そのため移植モデルとしての利用に適しているとして述べている。しかし、実際は、緑色蛍光の発光は臓器特異的、組織特異的であり、励起光を一様に照射しても発光を呈する臓器と呈さない臓器、同一臓器内でも発光を呈する組織と呈さない組織が存在した。(発光が明らかな臓器:骨格筋、心筋、毛根細胞、精巣、等。発光がわずかかほとんどない臓器:骨、脂肪組織、肺、肝臓、腸管粘膜、リンパ節、等。PCR法を用いてGFP蛋白陽性細胞を検出する方法は、緑色蛍光の発光量に関係なく利用可能であり、我々は、骨、皮膚、リンパ節、骨格筋についてGFP遺伝子を検出しえた。
現在我々は、このGFP transgenic ratを用いて、四肢移植モデルを作成し、移植後のsystemic chimerismについて検討している。既に移植手術は完了しており、移植後の変化を観察するため待機中である。前述のとおり、GFP緑色蛍光はマクロレベルでは容易に観察が可能であるが、細胞レベルでの検出は、臓器固有の自家蛍光のため確認が困難であるため、免疫染色法、蛍光顕微鏡像、PCR法をあわせ、統合的に検討している。
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