| 研究概要 |
本年度は研究計画に従い実験を進め,以下の結果を得た.
(1)ラット精巣(in vivo)におけるNGF,NGF-R(p75:低親和性受容体),Trk(A,B,C:高親和性受容体)の局在性:
発達段階(幼若期/16-20日令,思春期/45-50日令,成熟期/70-90日令)の異なるラット精巣におけるNGF,NGF-R(p75),Trk(A,B,C)の発現と局在性の日齢による変化を免疫組織化学的方法によって検討した.NGFの染色陽性反応は,生殖細胞系(特に精母細胞,精細胞)に認められ,NGF-R(p75),TrkA,TrkBの染色反応は微弱ながらセルトリ細胞に認められた.しかし,日齢による発現変動などは明瞭には捉えられなかった.また,NOドナーを精巣内に局所的に投与し,それらの発現への影響を調べたが,今回の実験条件下では明確な差としては捉え切れず,条件設定などを再考し継続中である.
(2)培養セルトリ細胞(in vitro)におけるNGF-R(p75),Trk(A,B,C)の局在性:
高純度の幼若ラットセルトリ細胞の培養系を用いてにおいて,セルトリ細胞におけるNGF-R(p75),Trk(A,B,C)の発現を検討した.NGF-R(p75),TrkA,TrkBの蛍光染色像は,それぞれ細胞表面全体(細胞膜上)に分布している細胞集団と核上細胞質にクラスター様の被覆小窩取り込みを示す細胞集団が認められた.NOドナー処理後には,核上細胞質に認められたクラスター様の蛍光像を示す細胞集団が減少していた.このことから,外因性の高濃度NOはセルトリ細胞上のNGF-R(p75),TrkA,TrkBなどの受容体取り込みに影響を与える可能性が考えられる.今後はリガンドの受容体への結合やリガンド・受容体複合体の細胞質えの取り込みに対するNOの影響を見極める必要がある.
(3)セルトリ細胞におけるNGF-R(p75),Trk(A,B,C)の発現に対するNOの影響:
セルトリ細胞の培養実験において,NGF-R(p75),Trk(A,B,C)のタンパク質とmRNAの発現変動をウェスタンブロット解析ならびにRT-PCR解析実験により検討した.セルトリ細胞のNGF-R(p75),TrkBのタンパク質ならびにmRNAの発現がNO処理によって明らかに減少した.
以上の事から,精巣での過剰のNO侵襲はNGF-R(p75),TrkBの発現に影響を及ぼし,精子形成の統御に関わるこれら受容体シグナル経路に重篤な影響をもたらす可能性が示された.
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