| 研究課題/領域番号 |
15591856
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 研究分野 |
眼科学
|
|---|
| 研究機関 | 大阪大学 |
|---|
研究代表者 |
五味 文 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (80335364)
|
|---|
| 研究分担者 |
生野 恭司 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (50294096)
大島 佑介 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (20362717)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2003 – 2005
|
| キーワード | 加齢黄斑変性 / 網膜色素上皮 / 酸化ストレス / CTGF / MMP |
|---|
| 研究概要 |
低酸素-再酸素化およびパラコート添加という2種類の酸化ストレス負荷を培養網膜色素上皮細胞に負荷すると、CTGF及びMMP2の発現が上昇した。次に、強い血管新生作用をもつVEGFの発現が、網膜色素上皮細胞内で酸化ストレス負荷により影響されるか検討したところ、VEGFも酸化ストレス負荷にて発現上昇しており、これらの分子の相互作用により、脈絡膜新生血管が伸展する可能性が示唆された。
次いで網膜への酸化ストレス負荷動物モデルの作成と、その動物を用いたin vivoでのCTGFの発現変化を検討した。網膜への酸化ストレス負荷は、ローズベンガルを尾静脈から投与し、後に強照明を与えてから暗室にもどす系を採用した。ローズベンガルの投与量は20mg/kgとし、負荷する光の照度と、暗室にもどしてから網膜切片を作成するまでの時間の検討を、酸化ストレスマーカーであるHO-1(hemeoxygenase-1)の発現変化をみながら行った。その結果、600ルクスの照度で、暗室飼育下30分でHO-1の発現上昇が有意に認められたことから、この系を採用した。この系を用いてICRマウスにストレスを負荷し、網脈絡膜を回収してRT-PCRを行ったところ、CTGFの発現上昇が確認された。免疫組織化学にてCTGF分子の網脈絡膜組織内での発現部位を確認したところ、網膜色素上皮細胞と脈絡膜血管内皮細胞に染色が認められた。CTGFは神経節細胞及び内網状層にも弱い発現を認めた。これらの部位の発現はストレスを加えていない眼球では認められなかったことから、酸化ストレスによるCTGFの誘導が網膜色素上皮細胞ならびに脈絡膜血管周囲で生じ、色素上皮の脆弱化や脈絡膜新生血管の誘導に関与することが示唆された。
さらに脈絡膜新生血管抑制因子であるtriamcinolone acetonide(TA)を酸化ストレス負荷後の培養網膜色素上皮細胞に添加し、VEGF,CTGFの発現変化を検討すると、VEGFの発現抑制されたのに対し、CTGFは発現がさらに増強した。TA負荷後のtube formation assayで血管管腔形成は抑制され、VEGFの抑制とCTGFの増強により脈絡膜新生血管が退縮する可能性を示した。
|
