| 研究概要 |
【目的】角結膜再生における羊膜を用いた培養角結膜上皮に対する免疫応答を明らかにするため、胎盤組織で発現するHLA-Gの角結膜上皮での発現と羊膜による影響を調べる。
【方法】羊膜上に再生した角結膜上皮のHLA遺伝子発現の変化をマイクロアレイで調べた。また、HLA-G α1ドメイン特異的なprimerを用いて、角結膜上皮でのHLA-Gの発現をRT-PCR,発現量の変化をReal-time PCRを用いて調べるとともに、HLA-Gタンパクの発現を免疫染色で検討した。GFPベクターに組み込み込んだヒト角膜輪部上皮のHLA-G遺伝子を赤白血病細胞由来株のK562(MHC class I-)へ導入した。HLA-G発現による影響を見るため、ヒト抹消血から分離したNK細胞の細胞障害性試験をBrdU release assayを用いて検討した。
【結果】マイクロアレイの結果によりHLA-G mRNAの発現が羊膜上に培養した結膜上皮において2.6倍増加していたが、他のHLA分子の発現は減少している傾向を認めた。角結膜上皮にはHLA-G mRNAが発現し、この発現はINF-γ刺激により増加した。Real-time PCRでも結膜上皮HLA-G mRNAの発現は羊膜上に培養すると約2倍増加していた。また、角膜上皮でのHLA-G発現量は羊膜の有無で差を認めなかったが、IFN-γ存在下では発現が2.7倍増加していた。免疫染色でも角膜上皮にHLA-Gの発現が確認され、IFN-gによりその発現は上昇していた。クローニングしたヒト角膜輪部由来のHLA-Gの配列はすでに報告されている配列と99%一致していた。HLA-Gを遺伝子導入したK562(K562-HLA-G)においてRT-PCRにおいてその発現を確認する事が出来た。K562-HLA-Gに対するNK細胞の細胞障害性はベクターを導入したコントロールと比べて優位な差は認められなかったが、傾向として障害性の減少を示していた。
【結論】羊膜は角結膜上皮におけるHLA-Gの発現を増加させることにより、術後の炎症や免疫反応を抑制している可能性が考えられた。
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